GST_pull_down试验方法(自己总结)(2),推荐文档.docxVIP

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2021-01-17 发布于天津
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蛋白的表达和纯化蛋白的表达将表达融合蛋白的质粒转入大肠杆菌菌株中挑单克隆于培养基中摇菌过夜获得种子液将种子液稀释于培养基中使起始为摇菌培养小时加入摇菌培养小时收菌将菌液倒入大离心管管菌液离心弃上清加入管重悬细胞离心弃上清加入管重悬细胞转移至离心管超声破壁破壁前在细胞悬液中加蛋白酶抑制剂破壁参数破至菌体由浑浊变为澄清加冰上放置将裂解液分入离心管中离心取上清吸取少量上清加入蛋白电泳上样缓冲液在沸水中煮离心取上清作电泳检测表达情况准备将原的弹至混匀取原液管离心弃上清加颠倒混匀离心弃上清反复次力卩颠倒混

GST蛋白的表达和纯化 GST蛋白的表达将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37C摇菌过夜，获得种子液。将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Am培养基中，使起始 OD60Q为0.1。 28C,220rpm摇菌培养2小时。加入50 pl 100mM IPTG,16?27C摇菌培养1?8小时。收菌，将菌液倒入大离心管，2管/50ml菌液，4C 5krpmx5min离心，弃上清。加入10ml PBS/管，重悬细胞,5krpm离心5min,弃上清。加入2ml PBS/管，重悬细胞。转移至5ml离心管。 ( 9)