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酶的特性实验 酶的特性实验 一、目的 酶是生物催化剂，生物体内化学反应基本上都是在酶的 催化下进行的。通过本实验了解酶催化的特异性以及 pH 、温度、抑制剂和激活剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代 谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。 二、实验原理 酶与一般催化剂最主要的区别之一是酶具有高度特异（专一）性，即一种酶只能对一种底物或一类底物（此类底物在结构上通常具有相同的化学键）起催化作用，对其他底物无催化反应。例如，淀粉酶和蔗糖酶虽然都是催化糖苷键的水解，但是淀粉酶只对淀粉起作用，蔗糖酶只水解蔗糖。还原糖产物可用班乃德试剂鉴定。 通过比较淀粉酶在不同 pH 、不同温度以及有无抑制剂或激活剂时水解淀粉的差异，说明这些环境因素与酶活性的关系。 唾液淀粉酶对淀粉的水解过程如下： 淀粉 蓝色糊精与碘反应： 蓝色  红色糊精蓝紫色  无色糊精红色  麦芽糖 无色 无色 三、 试剂和器材 （一）、试剂 1、 2%蔗糖溶液：用分析纯蔗糖新鲜配制。 2、 0.5%淀粉溶液 （二）、材料 唾液淀粉酶溶液： 先用蒸馏水漱口， 再含 10ml 左右蒸馏水，轻轻漱动， 2 分钟后吐出收集在烧杯中，纱布过滤，即 得清澈的唾液淀粉酶原液，根据酶活高低稀释 50 倍，即为 唾液淀粉酶溶液。 蔗糖酶溶液：取 1g 鲜酵母或干酵母放入研钵中，取蒸馏 水 12ml ，分次加入，边加边研磨约 10 钟，用漏斗加滤纸过 滤，滤液加 2 倍蒸馏水稀释。 （三）、仪器 恒温水浴（ 37℃）、沸水浴（ 100℃）、冰浴（ 0℃）、试管、 吸管、 2ml 、 5ml 、量筒、比色板、胶头滴管等。 四、操作方法 （一）、酶催化的专一性 取 6 支干净试管，按下表操作：操作项目 管号 1 2 3 4 5 6 0.5%淀粉 (ml) 1 1 0 0 1 0 2%蔗糖 (ml) 0 0 1 1 0 1 稀释唾液 (ml) 1 0 1 0 0 0 蔗糖酶溶液 (ml) 0 1 0 1 0 0 蒸馏水 (ml) 0 0 0 0 1 1 酶促水解 摇匀， 37℃水浴中保温 10-15min 班乃德试剂 (ml) 2 2 2 2 2 2 反应 摇匀，沸水浴中加热 5～ 10min 结果（颜色） （二）、温度对酶活力的影响 取 3 支试管，按下表操作：操作项目 管号 1 2 3 0.5%淀粉溶液 (ml) 2 2 2 稀释唾液 (ml) 1 1 1 温度预处理 5min （℃） 0 37 沸水浴 结果 摇匀，保持各自温度继续反应， 5 分钟后每隔 1 分钟从第 2 号管吸取 1 滴反应液于比色板上， 用碘液检查反应进行情况，直至反应液不再变色（只有碘液的颜色） ，立即取出所有试管，流水冷却 2min ，向各管加入碘液 2 滴，混匀。观察并记录各管反应现象，解释之。 （三）、pH 对酶活力的影响 取 3 支试管，按下表操作：操作项目 管号 1 2 3 pH5.0 磷酸缓冲液 (ml) 3 0 0 pH6.8 磷酸缓冲液 (ml) 0 3 0 pH8.0 磷酸缓冲液 (ml) 0 0 3 1%淀粉溶液 (ml) 1 1 1 稀释唾液 (ml) 1 1 1 结果（颜色） 摇匀，置 37 ℃水浴中继续反应 2 分钟，每隔 1 分钟从第 2 号管中取出 1 滴反应液于比色板上，加碘液检查反应进行 情况，直至反应液不再变色， 即可停止反应， 取出所有试管，并向个试管内加入 2 滴碘液，充分混匀，检查并记录各管颜色，解释 PH 对酶活性的影响。 （四）、激活剂和抑制剂对酶活性的影响 取 3 支试管，按下表操作：操作项目 管号 1 2 3 1% CuSO4(ml) 1 0 0 1% NaCl(ml) 0 1 0 蒸馏水 (ml) 0 0 1 稀释唾液 (ml) 1 1 1 0.1%淀粉溶液 (ml) 2 2 2 结果（颜色） 摇匀，置 37℃水浴反应 1min 左右即可用碘液检查 2 号试管淀粉水解程度，待 2 号试管的反应液不再变色时取出所有试管，并向各管内加入碘液 1-2 滴，观察并记录各管颜色，解 释结果。 五、注意事项 （1）各人唾液中淀粉酶活力不同，因此实验 2、3、 4 应随 时检查反应进行情况。 如反应进行得太快， 应适当稀释唾液；反之，则应减少唾液淀粉酶稀释倍数。 2）酶的抑制与激活最好用经透析的唾液，因为唾液中含 有少量 Cl －。另外，注意不要在检查反应程度时使各管溶液混杂。