分子遗传学 遗传重组.pptVIP

1. E.coli 的 RecA 蛋白是一个 39kDa 的单肽链，是 同源重组过程中最重要的蛋白质，也叫重组酶 (recombinase) 2. 作用：促进同源 DNA 联会和促进 DNA 分子间的 单链交换 二、同源重组的酶学机制 ① 单链 DNA 结合活性 ② 双链 DNA 结合活性 ③ NTP 酶活性 ④ 促进互补单链复性的能力 RecA 蛋白在同源重组的具体作用分为 3 个阶段 ： 1.RecA 的第一个 DNA 结合位点（初级位点）与单 链 DNA 结合，包被 DNA ，形成蛋白质 -DNA 丝状 复合物； 2.RecA 的第二个 DNA 结合位点（次级位点）与 1 个 双链 DNA 分子结合，形成三链 DNA 中间体，随 后单链 DNA 侵入双链 DNA ，寻找同源序列； 3.RecA 催化链交换，由被 RecA 包被的单链 DNA 从 5′→3′ 方向取代双链 DNA 分子之中的同源旧链， 形成异源双链，并发生分叉迁移 RecA 蛋白促进 2 个双链 DNA 分子链之间的交换 RecA 蛋白促进单 链 DNA 与双链 DNA 进行链交换 RecA 蛋白单体的 三维结构模型 RecBCD 蛋白 ： 1. 由 RecB 、 RecC 和 RecD 三个亚基组成。 2. 具有 5 种酶的活性 —— 外切核酸酶 V 、解链酶、核酸内切 酶、 ATP 酶和单链 DNA 外切酶 ； 3. RecBCD 蛋白参与细胞内的 RecBCD 同源重组途径 —— 首 先它与双链 DNA 分子自由末端结合，依靠其外切核酸酶 V 的活性同时降解 DNA 的 2 条链，然而，一旦遇到 chi （ χ ）序列， RecD 亚基就从复合物中释放出来，留下来的 RecBC 蛋白开始以解链酶的活性发挥作用，在水解 ATP 的同时，解开 DNA 双链，产生单链 DNA ，为 RecA 发挥 作用铺平道路，最终起动了链交换和重组反应 RecBCD 蛋白的作 用模型 RecF 途径 ： 这主要是质粒之间进行重组的途径，需要 的蛋白质有 RecA 、 RecJ 、 RecN 、 RecO 、 RecQ 和 Ruv 等 Site-specific recombination occurs at a specific DNA sequence. 位点特异性重组发生在 两条 DNA 的 特异位点 上。 The first example was found in the integration between l DNA and E. coli DNA. Section 3 Site-specific Recombination 位点特异性重组 λDNA integration λ 噬菌体的位点特 异性整合 Transposition is the movement of specific pieces of DNA in the genome. 转座过程中，转座成分从染色体的一个区段 转移 到另一 个区段或从一条染色体 转移 到另一 条染 色体。 由于转座作用总是伴随着转座成分的复制，故又 称为 复制重组 (replicative recombination) Section 4 Transposition 转座作用 Transposition resembles site-specific recombination being catalyzed by special enzymes. 转座类似于位点特异性重组，只不过需要特殊酶 的催化。 可转移成分现在一般叫做转座单元，简称 转座元（ transposons ），也叫做 转座子 。 虽然“转移”，但是“复制” ------ 转座作用涉及转座子的复制 （ replicative recombination ），当一个拷贝插 入基因组的新位置后，原来位置上仍保留一个拷 贝。 和同源重组及位点特异性重组不同，转座作用 不依赖转座子和靶点之间以及供点和靶点之间任 何的序列同源性。 § 1 细菌中的转座作用 转座子 插入 复制 使靶点处基因失活；存在及复 制加重了细胞的生理负担 基因缺失、倒位、易位； 作为袖珍同源区域允许重组发 生；某些细菌质粒进化的方式 细菌中的转座成分依 组成结构 可以分为： 插入 序 列 ( i n s e r t i o n s eq u e n ce s ) 、 复 合 转 座 子 (composite transposons) 、 TnA 转座子家族 (TnA family) 和 可转移噬菌体 (transposable phages) 1. 插入序列 (insertion sequences) IS insertion sequences (IS) includi