1总氮量的测定——凯氏定氮法.ppt

实验四 总氮量的测定 —— 凯氏 定氮法 目的和要求 ? 1. 学习凯氏定氮法的原理。 ? 2. 掌握微量凯氏定氮法的操作技术，包括标 准梳酸铵含氮量的测定、未知样品的消化蒸 馏、滴定及其含氮量的计算等。 实验原理 ? 天然有机物（如蛋白质、核酸及氨其酸等） 的含氮量用凯氏定氮法来测定。 ? 当天然含氮有机物与浓硫酸共热时，分解出 氮、二氧化碳及水。氮转变出的氨与硫酸化 合生成硫酸铵。分解反应进行得很慢，可加 入硫酸铜及硫酸钾或硫酸钠促进之，其中硫 酸铜为催化剂，硫酸钾或硫酸钠可提高消化 液的沸点。氧化剂过氧化氢也能加速反应。 ? 消化完了后，在凯氏定氮仪中加入强碱碱化 消化液，使硫酸铵分解，放出氨。用水蒸汽 蒸馏法，将氨蒸入过量标准无机酸溶液中， 然后用标准碱溶液进行滴定，准确测定氨量， 从而折算出含氮量。 ? 以甘氨酸为例，该过程的化学反应如下： ? 测定时常用硼酸溶液收集氨，氨与溶液中的 氢离子结全，生成铵离子，使溶液中氢离子 浓离降低。然后再用强酸滴定，直至恢复溶 液中原来氢离子浓度为止。所用的强酸的当 量数即相当于被测样品中氨的当量数。 ? 本法适用的范围为 0.2-1.0mg 氮。相对误差应 小于± 2% 。 试剂 ? ①浓硫酸 ? ②硫酸铜 ? ③硫酸钾 ? ④氢氧化钠溶液： 400g/L ? ⑤硼酸吸收液： 40g/L ，称取 20g 硼酸溶解于 500mL 热水中，摇匀备用。 ? ⑥ HCl 标准溶液： 0.1000mol/L 。 ? ⑦甲基红 - 溴甲酚绿混合指示剂： 5 份 2g/L 溴甲酚绿 95% 乙醇溶液与 1 份 2g/L 甲基红乙醇溶液混合均匀。 主要仪器： ? 如图，凯氏定氮蒸馏装置。 ? 50mL 消化管 ? 50mL 容量瓶 ? 分析天平 ? 电炉 ? 小玻璃珠 ? 3mL 微量滴定管 ? 烘箱 ? 1000mL 蒸馏烧瓶 ? 远红外消煮炉 实验流程 ? 样品消化 ? 蒸馏吸收 ? 滴定 实验流程 ? 样品消化 ? 准确称取 0.1g 左右的干燥面粉作为本实验的样品。 ? 准备 4 个 50ml 的凯氏烧瓶，并标号，向第 1 、 2 号烧瓶内各加 入样品 0.1g ，催化剂（ K2SO4-CuSO4· 5H2O ） 200mg ，消 化液 5mL 。注意加样品时应直接送入烧瓶底部，切勿沾于瓶 口及瓶颈上。向 3 、 4 号烧瓶加入 0.1ml 蒸馏水和与 1 及 2 号瓶 相同的催化剂和浓硫酸，作为空白对照，测量试剂中可能含 有的微量含氮物质，以对样品进行校正。 ? 小心摇匀后，按图安装消化装置，置于电炉上，在通风橱内 加热消化。 ? 消化时先以小火缓慢加热，待内容物完全炭化、泡沫消失后， 加大火力保持瓶内液体微沸，消化至溶液呈蓝绿色透明后， 再继续加热微沸 0.5h ，取下冷却，小心加入 20mL 水，移入 100mL 容量瓶中，用少量水洗定氮瓶，并入容量瓶中，再加 水至刻度，混匀备用。同时做试剂空白试验。 ? 蒸馏、吸收 ? 取 2 ～ 3 个 50ml 的维形瓶，加入 5ml 左右 2% 硼酸 - 指示剂混 合液，用表面皿覆盖备用。准确吸取 10mL 样品处理液由小 漏斗流入反应室，并以 10mL 水洗涤小烧杯使之流入反应室 内，塞紧玻璃塞。从安全漏斗中慢慢加入 10mL400g/L 氢 氧化钠，溶液应呈蓝褐色。不要摇动，将定氮球连接好。 用直火加热蒸馏 30min ，将蒸馏装置出口离开液面继续蒸 馏 1min ，用蒸馏水淋洗尖端后停止蒸馏。 ? 待样品和空白消化液均蒸馏完毕后，同时进行滴定。 ? 滴定 ? 全部蒸馏完毕后，用 0.0100N 标准盐酸溶液滴定各 锥形瓶中收集的氨量，直至硼酸 - 指示剂混合液由绿 色变回淡紫色，即为滴定终点。 结果计算 ? ? % 100 10000 14 0100 . 0 % / ? ? ? ? ? ? C B A ） （ 克氮 样品的总氮含量 若测定的样品含氮部分是蛋白质，则有 ? ? ? ? % 100 10000 4 0100 . 0 % / ? ? ? ? ? ? C B A 克氮 样品的总氮含量 式中： A 为滴定样品用去盐酸平均毫升数： B 为滴定空白用去 盐酸平均毫升数； C 为称量样品的克数； 0.0100 为盐酸的当量 浓度（实际上，此项应按实验中使用盐酸的实际浓度填写） ； 14 为氮的原