R4临床血液学检验第3讲细胞化学染色.pptVIP

细胞化学染色 概述 一.铁染色（Fe） 二.中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP） 三.过氧化物酶染色（POX） 四.苏丹黑染色（SBB） 五.过碘酸－雪夫反应（PAS，糖原染色） 六.酯酶染色 概述 1.细胞化学染色定义： 根据细胞化学原理显示、观察、研究细胞内酶类及其他化学成份的方法。 区分细胞 进行细胞化学染色后，差别出现 3.目的与作用 （1）鉴别细胞：POX、PAS、SB、酯酶染色 （2）鉴别疾病：Fe，NAP，需定量 （3）观察疗效 一、铁染色 原理：普鲁士蓝反应 酸性环境下： Fe+++ + K4［Fe（CN）6］→Fe4［Fe（CN）6］3 含铁物质 亚铁氰化钾 亚铁氰化铁（蓝绿色） 观察幼红细胞内、髓小粒上和吞噬细胞内有无蓝绿色颗粒或小块。 染色结果： 1.细胞外铁： 体内贮备铁的形式，实质是铁蛋白或其聚合体，髓小粒上的颗粒状、小珠状、团块状兰绿色物质，也可在吞噬细胞内。 反映铁储存情况 细胞外铁（左：髓小粒贮存铁，右：巨噬细胞吞噬） 细胞外铁半定量： 无　　　　　　（－） 弥散状　　　　（＋）　　　 颗粒状　　　　（＋ ＋ ） 小珠状　　　　（＋ ＋ ＋ ） 团块状　　　　（＋ ＋ ＋ ＋ ） 2.铁粒幼红细胞（细胞内铁）： 细胞内铁分级 幼红细胞内的铁，计数100个幼红细胞，记录浆内有兰绿颗粒的阳性细胞百分率。 Ⅰ型：1~2个铁颗粒 Ⅱ型：3~5个铁颗粒 Ⅲ型：6~10个铁颗粒 Ⅳ型：含11个颗粒以上 环形铁粒幼红细胞 正常参考值： 外铁：（+）~（++） 内铁：铁粒幼红细胞19%~44%，Ⅰ型多见，少数Ⅱ型。无环铁和铁粒红细胞。 临床意义 1.IDA：外铁（—），内铁明显减少或无 2.铁粒贫：内铁增多，颗粒大，环铁增多 3.MDS-RAS：类似于铁粒幼细胞性贫血 4.感染、肝硬化、慢性肾炎等继发性贫血：内铁减少或无，外铁不减少 二.中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP） 成熟中性粒细胞特异性颗粒内的一种酶。 1.偶氮耦联法原理： Ph9.2~9.8时， NAP水解 重氮盐 ↓ ↓ 磷酸萘酚钠→ 萘酚 →有色沉淀 偶氮耦联法阳性结果 2.钙钴法原理： Ph9.6时， NAP水解 Ca++ CO++ ↓ ↓ ↓ β-甘油磷酸钠→ PO43－ →磷酸钙→ 磷酸钴↓+硫化铵 →COS↓（棕黑色、灰黑色） 正常反应细胞 ALP仅存在于中性杆状核、分叶核粒细胞和巨噬细胞内，其余细胞（—）。 定量：只计算中性杆状核、分叶核粒细胞的ALP相应含量，称NAP定量。 定量方法： NAP阳性级别 NAP积分参考值： 资料1： 男性成人： 阳性率：3%~50%，积分：3~73分 女性成人： 阳性率：15%~70%，积分：17~145分 资料2： NAP积分参考范围：14~113分 各实验室应有自己的参考值。 临床意义： 1.鉴别感染类型 NAP活性与粒细胞的成熟程度、感染程度、感染类型有关，与肾上腺皮质激素水平有关。 细菌感染：NAP↑，球菌杆菌，急性 慢性 病毒感染：无变化或减低 2.血液病鉴别： （1）急性白血病： ALL：↑↑ 急粒：↓，伴细菌感染可↑ 急单：一般↓，也可正常 （2）慢性白血病： CLL：↑↑ CML：0分 （3）白血病愈后： ALL、CLL好转：↓，缓解后正常 CML好转：↑，缓解↑→正常 血液病鉴别： (4). 常见疾病鉴别 (1)PNH↓，AA↑ (2)真红↑，继发性红细胞增多：无变化 (3)类白反应↑↑，CML降低 (4)恶性组织细胞病↓，反应性组织细胞增多↑↑ (5).存在生理性波动 （1）年龄：婴儿、儿童高，老年人低 （2）性别：成年女性高于男性，经期和妊娠期高 （3）应激状态：增高 三.过氧化物酶染色（POX） 原理： 细胞溶酶体颗粒中POX能使供氢体“无色联苯胺”脱氢氧化为联苯胺蓝，同时氢传递给H2O2生成水，联苯胺蓝与“亚硝基铁氰化钠”进一步结合生成更稳定的蓝绿色物质沉淀于酶活性部位。 POX染色阳性效果 正常细胞反应 1.粒细胞： 原粒→早幼粒→中性中幼粒→中性分叶核 嗜酸粒 嗜碱粒 (-、±、+) （++） （++++） （++++） （+++