乳酸菌的生理生化特性介绍doc9页正式版.docx

1.形态和培养特征观察 采用牛肉膏蛋白胨培养基 ,将已纯化后的甘油菌种活化后于 37℃下培养 20～ 24h , 并进行革兰氏染色及菌体形态和菌落特征的观察。染色方法参照微生物鉴定实验指导 2.生长条件试验 (1) 耐盐性试验 (NaCl 浓度 :0. 85 、1. 20 和 1. 71) (mol/ L) ; (2) 耐酸碱试验 (p H :4. 3 、5.7 、6.8 、8. 4 、8.6 和 8.7); 温度梯度试验 (温度 : 10 ℃、 30 ℃、 40℃、 50 ℃、 55 ℃、 60 ℃和 65℃ ) 。 分别将参试菌接种于以上处理的液体培养基中培养 48 h , 记录生长状况。 3.生理生化试验 ⑴过氧化氢酶测定 将实验菌接种于 PGY 培养基斜面上 ,37 ℃培养 20h — 24h, 取一环接种的培养物 ,涂于干净的 载玻片上 ,然后在其上滴加 3% － — 15% 的过氧化氢 ,有气泡则为阳性反应 ,无气泡为阴性反 应。 ⑵葡萄糖产酸产气实验 在 PY 基础培养基内加入 30g 葡萄糖和 5% 吐温 -80,1.6g/100mL 的溴甲酚紫 1.4mL 作指示 剂, 在培养基内放置一小倒管 ,分装试管置 37℃培养 24h, 经培养后 ,指示剂变黄表示产酸 ,倒管内出现气泡 , 表示产气。 ⑶淀粉水解实验 接种新鲜的菌种于含有 0.5g 可溶性淀粉的 PY 基础培养基中 ,取少许培养液于比色盘内 ,同时 取未接种的培养液作对照 ,分别在其中加入卢哥氏碘液 .不显色表示淀粉水解 ,显蓝黑色或蓝 紫色时 ,表示淀粉未水解或水解不完全。 ⑷明胶液化实验 将实验菌接种于明胶基础培养基中 ,置 37 ℃培养 ,以一支未接种的试管作为对照。 将接种的和 未接种的对照管置于冰箱或冷水中 ,等待对照管凝固后记录实验结果 ,反复观察对比多次。如 对照管凝固时 , 接种管液化为阳性反应 ,凝固为阴性反应 ⑸甲基红（ M.R ）试验 接种实验细菌于 PYG 培养基，于 37 ℃培养 2 天后，于培养物中加入几滴甲基红酒精溶液， 如呈红色，表示阳性。 ⑹乙酰甲基甲醇 V-P 实验 接种新鲜的实验菌种于培养基中 , 37 ℃培养 2 天后 ,取培养液 1mL 在其中 加入 1ml 10 ％的 NaOH ，混匀，再加入 3 － 4 滴 2% 氯化铁溶液。数小时后，培养基表面的 下层出现红色者，为阳性 ⑺柠檬酸盐 取幼龄菌种接种于柠檬酸盐斜面培养基上，适温培养 3 －7 天，培养基呈碱性（蓝色）者为阳性反应，不变者则为阴性 ⑻酪素水解试验 牛奶平板的制备：取 5g 脱脂奶粉加入 50mL 蒸馏水中（或用 50mL 脱脂牛奶），另称 1.5g 琼脂溶于 50mL 蒸馏水中，将两液分开灭菌。待冷至45 －50 ℃时，将两液混匀倒平板，即 成牛奶平板。将平板倒置过夜，使表面水分干燥，然后将菌种点接在平板上，每皿可点接 3 5 株菌。适温培养 1、3 、5 天，记录菌落周围和下面酪素是否已被分解而呈透明。配制该培养基时，切勿将牛奶和琼脂混合灭菌，以防牛奶凝固 ⑼厌氧生长测定 将菌种接入营养肉汤平板后 ,用密封带包好放入 CO2 培养箱 37 ℃培养 2 天后 ,观察生长情况 , 生长则为阳性 (10) 厌氧硝酸盐产气 接种封油：以斜面菌种用接种环接种后，用凡士林油（凡士林和液体石蜡为 1:1 ）封管，封 油的高度约 1 厘米。必须同时接种不含有硝酸钾的肉汁胨培养液作对照。 观察结果： 培养 2 － 7d，观察在含有硝酸钾的培养基中有否生长和产生气泡。 如有气泡产生， 表示反硝化作用产生氮气， 为阳性反应。 但如不含硝酸钾的对照培养基也可产生气泡， 则只 能按可疑或阴性处理。 (11) 石蕊牛奶的反应 牛奶中主要含有乳糖和酪蛋白， 在牛奶中加入石蕊是作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。 石 蕊在中性时呈淡紫色，酸性时呈粉红色， 碱性呈蓝色，还原时则自上而下地褪色变白。 观察 其产酸、产碱、胨化、酸凝固、凝乳酶凝固、还原情况 (12) 糖发酵实验 将需要测定的糖或醇类等碳水化合物加入 PY 基础培养基中 ,按表分装含 5mL 培养基的试管 . 分别取 0.2mL, 被鉴定菌株接到灭菌后的碳水化合物培养基中 37 ℃培养 24h, 振荡培养。 检测 时取培养液少许置于比色盘内 ,同时取未加碳水化合物的 PY 培养液作为对照 , 滴加试剂比较 颜色的变化 ,记录产酸的强弱 . 附一些培养基： ①PY 培养基（ 100mL ）：蛋白胨 1.0g, 酵母提取物 1.0g, 无机盐溶液 4.0mL[ 盐溶液成分 :无 水 CaCl2 0.2g,MgSO4 20.0g ,K2HPO4 1.0g,