整理HILIC色谱柱介绍.pptxVIP

亲水作用色谱（HILIC）是近年来色谱领域研究的热点之一。本文简介了 HILIC 的起源、定 义、分离特点；比较了 HILIC 和反相色谱（RPLC）的选择特性，讨论了HILIC 与质谱联用 技术的特点，并对其使用中的注意事项进行了总结。 HILIC 的概念 亲水色谱（HILIC）是一种用来改善在反相色谱中保留较差的强极性物质保留行为的色谱技 术。它通过采用强极性固定性，并且结合高比例有机相/低比例水相组成的流动相来实现这 一目的。而这样的流动相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱（ESI-MS）的灵敏度。 HILIC 的???离机制 HILIC 的分离机理在目前还存在着争议，主要包括以下三个方面：（1）分配机理（2）离子 交换（3）偶极-偶极相互作用。更多的试验现象则表明 HILIC 的保留机理包含氢键作用、偶 极作用和静电作用等多种次级效应，很难将其区分开来。 HILIC 影响保留的主要因素 普遍认为 HILIC 保留行为受到多种参数的影响，如固定相的官能团、有机改性剂的含量、 流速、柱温、流动相缓冲体系的 pH 值、缓冲盐的种类和浓度。 影响样品在固定相上的保留行为的最主要因素都是流动相中有机相的比例，例如乙腈的含 量的增加会显著增加样品的保留因子。在 HILIC 分离模式中，溶剂洗脱能力由弱到强为： 四氢呋喃丙酮乙腈异丙醇乙醇甲醇水, 流动相中水是最强的洗脱溶剂。一般采用乙 腈-水体系作为流动相，其中水相的比例为 5%-40%以保证其显著的亲水作用。如图 1 所示， 将流动相中的水相用甲醇、乙醇、异丙醇代替，随着流动相极性的减小，待测物在柱上的保 留就会增强。;HILIC 正好可以解决这些问题，它提供了一种与传统RPLC 互补的保留方式，能够使在RPLC 上保留较弱或没有保留的物质在 HILIC 柱上提供合适的保留，如图 2 所示：;5.HILIC 与质谱技术联用 HILIC 可为强极性和强亲水性的化合物提供合适的保留。通过优化多个色谱参数，有利于 实现目标组分和基质中干扰物质的分离，从而降低基质效应的影响；而含有高比例水溶性有 机相的流动相又有利于提高质谱离子化效率，进而提高质谱分析的灵敏度。 质谱响应在某种程度上是取决于流动相中有机相的比例。采用 ESI 源时，毛细管中离子 化的过程类似于一个电泳过程。由于毛细管被加高压，形成带电液滴。溶剂蒸发，离子向液 滴表面移动，当液滴表面电荷产生的库仑排斥力与液滴表面的张力大致相等时，液滴会分裂 成更小的液滴，对于半径10nm 的液滴, 液滴表面形成的电场足够强，电荷的排斥作用最 终导致部分离子从液滴表面蒸发出来，形成了气相离子。而有机相的表面张力比水相的表面 张力小得多。因此，在相同的条件下，流动相中有机相的比例越高，质谱的响应越高。从图 4 可以看出，在HILIC 柱上的响应比在RPLC 柱上的响应高出十倍左右。;1.HILIC 柱如何平衡？ HILIC 柱使用 70%的乙腈水溶液平衡。 2.HILIC 柱如何保存？ HILIC 柱使用 90%的乙腈水溶液保存。 一直使用 Waters 的 HILIC 较多，感觉质量还行，但是要小心 waters 的 HILIC 是分两 种类型的填料的 BEH HILIC 和 HILIC。 很多 waters 的销售都不清楚之一点。但是大家一定要注意，这两款的区别是很大的，保留 的效果是不同的。 费罗门公司的HILIC 柱，感觉是小家碧玉型的，保留能力不是太强，但是清秀文雅， 峰 型很好看。 HILIC 的 流动相推荐使用乙腈。 推荐使用乙酸铵， 这也以后再说。 不能使用 100% 的乙腈，推荐使用到 95%就行了。 不能使用 60%以下的乙腈。 所以梯度范围小。但是足够用了。 因为 100%的乙腈可能对HILIC 的中亲水的部分不利于键合相的伸展开。 使得保留性能下降。其中的解释也是经验，研究论文解释的也让人不太信服。所以大家可以 一起讨论一下这点。 使用甲醇的问题也是这样的。在甲醇分子附近，HILIC 的保留能力下降了，色谱峰型较差。 这也是经验结果。 Pubmed compound XlogP -2 -3，