丙戊酸钠对体外培养的人晶状体上皮细胞增生的抑制作用.doc

华中科技大学 硕士学位论文 丙戊酸钠对体外培养的人晶状体上皮细胞增生的抑制作用 姓名：田博 申请学位级别：硕士 专业：眼科学 指导教师：王智丙戊酸钠对体外培养的人晶状体上皮细胞增生的抑制作用 华中科技大学同济医学院附屈协和医院眼科 2006级硕士研究生：田博 导师：王智副教授 冃的：探讨丙戊酸钠(sodium valproate, VPA)对体外培养的人晶状体上皮细胞 (human lens epithelial cells,HLECs)增生和细胞周期的影响°方法：采用不同浓度 的 VPA(0.5 mmol ? L-i、1 mmol ? L-i 2 mmol ? L-i 4mmol ? L-i)作用于人晶状 体上皮细胞，四甲基偶氮呼蓝法(MTT)检测在不同时间点(24h、48h、72h) VPA 对细胞增生的抑制作用；流式细胞仪测定VPA(1 mmol?L」、2 mmol?Lj)作用 于HLECs 48h后细胞周期分布情况;Western-blot测定在VPA(1 mmol?S 2 mmol?L“)作用于HLECs48h后，P21 (细胞周期依赖性激酶抑制因子)在蛋白 质水平表达量的改变。结果：MTT检测显示VPA对体外人晶状体上皮细胞的增 生的抑制作用呈时间和剂量依赖性。VPA作用48h后，各药物浓度组(0.5 mmol ? L-i、1 mmol ? L-i、2 mmol ? L-i、4mmol ? L-i)细胞生长抑制率分别为 11.05%, 21.58%, 26.67%和38.25%,流式细胞仪检测显示VPA可阻滞HLECs由G0/G1 期向S期转换，使G0/G1期细胞增多，S期细胞减少。经2 mmol?L-VPA作用 48h, G0/G1期及S期细胞比例分别为85.40±3.90%和7.35.±1.47%,较阴性对 照组(53.14±1.71% 和 35.3H1.14%)差异具有统计学意义(P0.05)。Western blot检测发现VPA可促进P21蛋白质水平的表达。VPA处理48h后，各组平均 灰度比值分别为 0.582±0.082(1 mmol ? Lx)和 0.914±0.113(2mmol ? L-i),与阴 性对照组(0.303±0.029)比较，差异有统计学意义(P0.05).结论：VPA可以 通过促进P21表达，使人晶状体上皮细胞阻滞于G0/G1期，最终抑制人晶状体 上皮细胞增生。 【关键词】丙戊酸钠；人晶状体上皮细胞；增生；后囊膜混浊 Inhibitory effect of sodium valproate on proliferation of human lens epithelial cells in vitro Department of Ophthalmology, Union Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430022,Hubei Province, China 2006 Master Candidate: Tian Bo Tutor: Professor Wang Zhi Abstract [Abstract] Objective To investigate the effects of sodium valproate (VPA) on the proliferation and cell cycle in vitro. Methods HLECs were treated with VPA in different concentrations(0.5 mmol L-i、1 mmol L-i、2 mmol-L-i、4 mmol L-i) for different hours(24h、48h、72h). Cell proliferation was assessed by MTT assay. After HLECs were treated with VPA(lmmol-L-i、2 mmol L-i)for 48h,cell cycle was analyzed by flow cytometry and the expression of p21(cyclin?dependent kinase inhibitor) was detected by Western blot. Results MTT staining colorimetry showed that the HLECs proliferation was markedly inhibited and the effects was time an