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考马斯亮蓝染色法测定蛋白质的含量 原理：考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后，染料的最大吸收从465nm变 为596nm蛋白质-染料复合物具有很高的消光系数，因此蛋白质测定 的灵敏度较高 , 最低检出量为 1ug 蛋白质.染料与蛋白质的结合 , 大约 只需2min,结合物的颜色在1h内是稳定的.一些阳离子乙醇等物质不 干扰测定 , 但去污剂严重干扰测定 , 少量的去污剂可通过用适当的对 照而消除 , 犹豫染色法简单迅速 , 干扰物质少 , 灵敏度高 , 现已广泛用 于蛋白质含量的测定 . 试剂:①标准蛋白质溶液：可用牛血清清蛋白。或根据牛血清清蛋白 的紫外消光系数来确定 ②蛋白染色剂的配置：取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml95% 愚蠢，假如100ml85%磷酸，将溶液用水稀释到1000ml。试剂的终浓 度为 0.01%考马斯亮蓝 G-250， 4.7%乙醇和 8.5%磷酸 操作： 1. 标准曲线的绘制 （1） 取 7支试管，分别假如 0.4ml ，0.6ml ，0.8ml ，1.0ml ，1.2ml ， 1.4ml， 1.6ml 标准蛋白质溶液，用水不足到 2ml （2） 去 8 支试管， 0 号加入 0.1ml 蒸馏水， 1 ~7号试管一次加 入 0.1ml 步骤（1）的标准蛋白质稀释液， 然后各加入 5ml 蛋白染色剂，充分振荡混合，2min后于595nm测定光吸收 值。以蛋白质浓度为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标 准曲线作为定量的依据。 2.样品的测定 595nm光吸度，用去样品溶液 595nm光吸度，用 实验结果 实验结果 测定所用的标准曲线方程为：v=0.1296x + 0.0907。考马斯亮蓝G-250 法测量蛋白质含量与凯氏定氮法相比较误差范围 3%?8%。