高中生物血红蛋白提取和分离人教选修.pptx

;血红蛋白; 本课题学习目标;（一） 凝胶色谱法（分配色谱法）;4.凝胶色谱法分离蛋白质的原理和具体过程; （二）缓冲溶液; （三） 电泳：;;; 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决 于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。 （SDS的作用）为了消除净电荷对迁移率的影响， 可以在凝胶中加入SDS。 ;用SDS测定蛋白质分子量的方法; 二、实验操作;(2)血红蛋白的释放：;甲苯层（无色透明）;(4)透 析：;透析过程动画演示;2.凝胶色谱操作:;（2）凝胶色谱柱的装填; ;（3）样品加入与洗脱;（3）样品加入与洗脱;思考下面的问题：; 血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即:样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去，即:样品的纯化；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。;（三）SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做）; 观察你处理的血液样品离心后是否分层（见教科书图5-18），如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。; 如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。;3、课题重点：凝胶色谱法的原理和方法 4、课题难点： ①样品的处理 ②色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。;血液;血红蛋白;1.分离生物大分子的基本思路：;凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示; 教学反馈 ;5．血液由血浆和各种血细胞组成，其中（ ）的含量最多。 A白细胞 B血小板 C红细胞 D淋巴细胞 6．为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂（ ）。 A. NaCl B.甲苯 C.蒸馏水 D.柠檬酸钠 7．将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显看到试管中的溶液分为4层， 其中第3层是（ ） A无色透明的甲苯层 B脂溶性物质的沉淀层 C血红蛋白的水溶液 D其他杂质的暗红色沉淀物; 本课题学习目标; （二）缓冲溶液; （三） 电泳：;透析过程动画演示;血红蛋白;1.分离生物大分子的基本思路：