中药制剂检测技术 知识点1：仪器工作原理和操作 项目6任务3知识点1-《中药制剂检测技术》课程电子讲义.doc

《中药制剂检测技术》电子讲义 知识点 仪器工作原理 学时 2学时 教学内容 高效液相色谱法的仪器工作原理 1.讲授并探讨高效液相色谱法的仪器工作原理与构造（50min）； 2.讲授并探讨高效液相色谱仪操作通法（50min）； 教学重点 仪器构造 教学难点 高压输液泵、六通阀、色谱柱、检测器 参考资料 中药制剂检测技术，田友清，人民卫生出版社，2018年 中药制剂检测技术，张钦德，人民卫生出版社，2013年 中药制剂检测技术，卓菊，中国医药科技出版社，2013年 讲义内容： 高效液相色谱法的仪器工作原理 高效液相色谱法 本法是采用高压输液泵将流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离并测定含量的方法。具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广（供试品不需气化，只需制成溶液即可）、流动相选择性大、流出组分易收集、色谱柱可反复使用等特点，对于挥发性低、热稳定性差、分子量大、离子型化合物尤为适宜。随着科学技术在髙效液相色谱法中的应用，为HPLC法控制中药及中药制剂的质量提供了科学基础和广阔的前景，已成为中药及中药制剂含量测定最常用的分析方法。 一、仪器工作原理 （一）仪器的构造 高效液相色谱仪一般由高压输液系统、进样系统、色谱分离系统、检测系统和数据处理系统组成。 高效液相色谱仪的构造：1.贮液罐；2.脱气装置；3.梯度洗脱；4.高压输液泵；5.流动相流量显示；6.柱前压力表；7.输液泵头；8.过滤器；9.阻尼器；10.进样装置；11.色谱柱；12.检测器；13.数据处理系统；14.废液贮罐 1.髙压输液系统 由贮液罐、脱气装置、高压输液泵、过滤器、梯度洗脱装置等组成。 （1）贮液罐：由玻璃、不锈钢或氟塑料等化学惰性、耐腐蚀材料制成，有无色及棕色两种贮液罐。贮液罐的位置应高于泵体，以保持流动相的静压差。为了防止因溶剂蒸发而引起流动相组成的改变和气体进入C液罐，在使用过程中应密闭。 （2）脱气装置：贮液瓶配有抽真空及吹入惰性气体的脱气装置。脱气装置能除去流动相液体中的气泡。如果流动相中含有气泡，在分离的过程中，气泡在高压下会自溶剂中逸出，影响高压泵的正常工作和检测器的灵敏度。脱气的方法有加热回流法、抽真空脱气、吹惰性气体脱气、超声脱气和在线真空脱气法等。 1）超声波振动脱气：将流动相置于超声波提取器中，用超声波振荡10~30分钟即可脱气。 2）抽真空脱气：用微型真空泵，减压至0.05~0.07mPa可除去溶解的气体，如用水泵连接抽滤瓶和G4微孔玻璃漏斗可同时除去固体杂质和液体中的气体，在使用抽真空脱气时，会使混合溶剂的组成发生变化，因此，应先将各溶剂进行脱气后再混合成多元溶剂。 3）加热回流脱气：将流动相装入加热冷凝装置，先经加热变成气体再冷凝成液体，达到脱气的目的，该法具有较好脱气效果，但不适用于混合流动相。 4）吹氦脱气：将氦气在0.1mPa压力下，以60ml/min的速度缓慢地通过流动相10~15分钟，除去溶解在溶剂中的气体，此法的特点是适用范围广、脱气效果好、价格昂贵。 5）真空在线脱气：把真空脱气装置连接到贮液系统中，实现流动相通过膜过滤器后的连续真空脱气。 （3）髙压输液泵：是高效液相色谱仪的关键部件之一，用以完成流动相的输送任务。 对泵的要求是：耐腐蚀、耐高压、无脉冲、输出流量范围宽、流速恒定，且泵体易于淸洗和维修。高压输液泵可分为恒压泵和恒流泵两类，常使用恒流泵（其压力随系统阻力改变而流量不变）。 双泵串联补偿法是将两个柱塞往复泵按下图所示连接。泵1的缸体容量是泵2的缸体容量的两倍，泵1和泵2的柱塞按相反方向运动。当泵1吸取溶液时，泵2排出溶液；当泵1排液时，泵2吸取泵1缸体容量的一半。如此往复运动，泵2补充了在泵1吸液时的压力下降，减少了输液脉冲，使流动相流出量相同。 图 两种连接方式的柱塞往复泵 （4）过滤器：在流动相进入色谱柱之前，用于除去流动相中的固体颗粒杂质的直径为0.45μm滤膜装置。 （5）梯度洗脱系统：梯度洗脱系统是指按一定程序改变混合流动相的组成，使流动相强度（极性、pH或离子强度等）进行程序性改变的装置。按加压的方式和溶剂混合顺序的不同，可分为高压与低压两种梯度洗脱装置。 高压梯度洗脱系统是按预先设计的梯度程序，通过控制溶剂贮器阀驱动器的开闭时间，使高压泵按比例将不同贮器中的溶剂输入混合器，在混合器中混合成流动相后进入色谱柱。低压梯度洗脱系统是在常压下用比例阀将多种溶剂按比例混合后，再用泵增压后送入色谱柱。低压梯度洗脱系统价格便宜，较易实现多元梯度洗脱，目前多采用低压梯度洗脱系统。 2.进样系统 进样系统的作用是将试样引入色谱柱，要求进样系统具有使用方便、重复性好、进样量可变范围大不影响柱分离效能的能力。常用的进样器有高压进样阀、六通手动进样阀及自动进样器等装置。 （1）高压进样阀：高压进样