实验五血清尿素氮的测定.docx

血清尿素氮的测定 一.实验原理 血清中尿素在氨基硫脲存在下， 与二乙酰一肟在强酸溶液中共煮时， 可生成双乙 酰和尿素形成的红色复合物 (二嗪衍生物)，其颜色深浅与尿素含量成正比，与同 样处理的尿素标准液比色。即可求得血清中尿素的含量。 由于反应在强酸中进行，所产生的羟胺是干挠物质，所以必须用氧化剂将其 氧化除去。 在呈色反应中产生的有色复合物对光不稳定. 加入氨基硫脲可增加其稳定性， 还可提高尿素与双乙酰反应的灵敏度。 ?实验操作 取试管3支，注明空白管、标准管、测定管，按下表操作 管 试 号 剂 测定管 标准管 空白管 血清(ml) 0.02 尿素氮标准应用液(ml) 0.02 蒸馏水(ml) 0.02 二乙酰一肟试剂(ml) 0.5 0.5 0.5 尿素氮试剂(ml) 5.0 5.0 5.0 混匀后置沸水浴中煮沸 12分钟，取出在冷水中冷却 5分钟，分光光度计波长 540nm比色，以空白管调零，测定各管吸光度值。 三?计算 血清尿素氮( mmol / L )= —测标—定准—管管—吸吸—光光—度度— X 17.85 正常值参考范围 3. 57?14. 28mmol/ L 四 . 临床意义 血液中非蛋白含氮化合物包括尿素、尿酸、肌酸、肌酐、 胆红素及氨等。其 中尿素含量约占 l ／ 3 ? 1 ／ 2。尿素是蛋白质代谢的产物.通过肾脏排出，故测血 清尿素氮可作为检测肾脏功能的试验，并且其增高程度与病变的严重程度呈平行 关系。 五.试剂 1?尿素氮试剂：蒸馏水 lOOml，浓硫酸44ml, 85%磷酸66ml，冷却至室温后， 加氨基硫脲50mg,硫酸镉(3CdSO4 ? 8H2O)2g，溶解后稀释至1000ml。 2.20g/ L二乙酰一肟试剂：称取二乙酰一肟 20g，加入蒸馏水约 900ml，溶解后 稀释至 1000ml. .尿素氮标准贮存液(357mmol/L):称取尿素1.072g溶解于蒸馏水中定容至1000ml .尿素氮标准应用液(17.85mmol/ L);取贮存液5ml，加蒸馏水至100m。