DB45∕T 2026-2019 甘蔗DNA指纹图谱采集技术规程(广西壮族自治区).pdfVIP

ICS 65. 020. 01 B 61 DB45 ~b. 区地方标准 广西壮族 自 J 口 DB 45/T 2026-2019 甘震 DNA 指纹图谱采集技术规程 Technical regulations for the collection of sugarcane DNA fingerprint 2019 - 12 - 05 发布 2019 - 12 - 30 实施 广西壮族自治区市场监督管理局 发布 DB45/T 202 6--2019 目IJ I=l 本标准按照GB/T 1. 1-2009给出的规则起草。 本标准由广西壮族自治区帽业办公室提出并宣贯监督。 本标准由广西糖业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:广西壮族自治区农业科学院甘展研究所。 本标准起草人:高轶静、周会、杨荣f中、熊发前、段维兴、张保青、杨翠芳、周珊、王泽平、张革 民。 I DB45/T 202 6--2019 甘展DNA t旨纹图谱采集技术规程 1 范围 本标准规定了甘庶DNA指纹图谱采集的术语和定义、原理、仪器设备、操作程序及数据采集。 本标准适周于广西壮族自治区范围内保育和推广的甘肃品系、品种、杂交种以及甘庶种质资源的DNA 指纹图谱的采集。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 2. 1 简单重复序歹~ simple sequence repeat (SSR) 一类由几个核昔酸(→般为2~5个)为重复单位组成的简单串联重复序列。 根据其保守的边界序列 设计引物，可通过PCR、电泳技术分析重复序列的重复次数变异。 2.2 核心寻|物I组合 core primer combination 指品种DNA指纹鉴定优先边用的一套SSR引物，具有多态性高、重复性好、 稳定性高、电泳峰易区分 等综合特性，作为统一用于品种DNM旨纹数据采集和品种鉴定的习|物，以保证不同实验室数据具有可比 性。 2.3 参照品种 refer enc e var i ety 对应于特定位点不同等位变异的一组品种，用于辅助确定待测样品在某个位点上等位变异扩增片段 的大小，校正仪器设备的系统误差， 以保证不同实验数据具有可比性。本标准选择广西壮族自治区范围 内的主栽品种之一ROC22和重要亲本桂糖1]号作为参照品种。 3 原理 由于不同甘庶的基因组DNA存在简单重复序列的重复次数差异，这种差异可采用PCR扩增和电泳检测 获得的DNA指纹对不同品种加以区分。 4 仪器设备和试剂配制 仪器设备和试剂配制方法见附录A。 5 操作程序 DB45/T 202 6--2019 5. 1 样品准备 每份样品至少采集两批，每批采集的样品均包括参照品种ROC22和桂糖11 号:单次采集的样品独立 进行实验，作为一次重复。 5. 2 DNA :t~IUl 取嫩叶组织约0.2g，迅速剪碎，放入盛有液氮的研钵进行充分研磨后置于离心管中，加入1 mL预热 至65 C 的DNA提取液， 65C 水浴30m