CTAB是种阳离子去污剂.docVIP

CTAB 是一种阳离子去污剂 .它能与核酸形成复合物 .这些复合物在低盐溶液中会因溶解 度的降低而沉淀 .而在高盐溶液中可解离 .从而使 DNA 和多糖分开 .再用乙醇沉淀 DNA 而除 CTAT.在该法中使用的聚维酮 (PV P)与多酚结合形成复合物 .从而可有效避免多酚类化合物介导的 DNA 降解 1)称取 100g 样品土壤 ,加入 10%SDS100ml 溶化 ,于 70e 水浴中温浴 1h每 10min 振荡 10s 2)加入 20g 玻璃珠 (900mg 玻璃珠 P015g 土壤 ),振荡 10min, 物理破坏细胞 3)在细胞裂解液混合物中加入 20gPVPP 以除去腐殖质 4) 用 0112M 磷酸缓冲液 (pH810) 反复冲洗回收 DNA 5)于 DNA 悬浊液中加入 NaCl 溶液 ,至终浓度为 015M 6)加入 015 体积 50%聚乙二醇 (PGE)8000,5e 培育 12h 以沉淀 DNA 7)4e,5000xg 离心 10min 回收 DNA 8)从疏松的沉淀中吸弃上清 9)将沉淀反复抽提 :等体积饱和酚抽提 ,收集上清液 ;等体积酚 B 氯仿 B 异戊醇 (25B24B1) 抽提 ,收集上清液 ;等体积氯仿 B 异戊醇 (24B1) 抽提 ,收集上清液 ,且视蛋白质多少 ,反复进 10)在液体中加入乙酸钾 (KAC) 至终浓度