瑞博edu试剂盒c10341-3使用说明.docVIP

产品简介 试剂盒应用EdU直接测定细胞内DNA的变化。EdU（5-Ethynyl -2’- deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在 细胞增殖时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子中，通过基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应快速检测细胞DNA复制活性，适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。 与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU与T非常相似，而EdU染料只有BrdU抗体的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等），可有效避免样品损伤，而且无需抗原抗体反应，能在细胞和组织水平更准确地反映DNA复制活性。 ? 试剂盒内容 EdU溶液?(试剂A) 1000X 20?μL 100?μL 200?μL - - - EdU溶剂?(试剂A) 粉末 - - - 2 mg 10 mg 50 mg Apollo?反应缓冲液?(试剂B) 20X 500 μL 2.5 mL 5 mL 500 μL 500 μL 500 μL Apollo?催化剂溶液?(试剂C) 100X 100 μL 500 μL 1 mL 100 μL 100 μL 100 μL Apollo?荧光染料溶液?(试剂D) 300X 30?μL 150?μL 300?μL 30?μL 30?μL 30?μL Apollo?缓冲添加剂?(试剂E) 粉末 100 mg 500 mg 1 g 100 mg 100 mg 100 mg Hoechst 33342 (试剂F) 100X 150?μL 750?μL 1.5 mL 150?μL 150?μL 150?μL ? ? ? ? ? ? ? 运输与保存 室温运输，4?C储存，勿冻存，荧光试剂请避光保存，可稳定储存一年。? 使用前须知 贴壁细胞宜采用荧光检测方式，适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜、高内涵筛选仪检测，亦可进行爬片检测，。 悬浮细胞可用涂片方式荧光检测，亦可采用流式细胞仪分析，但流式细胞仪需要具备相应荧光通道(表4)。 实验准备 ? PBS (pH 7.2~7.6) ??渗透剂(含0.5% Triton X-100的PBS) ???甘氨酸溶液(2 mg/mL)（去离子水配置）???细胞固定液(即含4%?多聚甲醛的PBS) ?? 96/24/12/6孔培养板? ????注意：请使用一次性手套，废液请妥善处理。 ? 实验参考 表1??EdU培养基及染色反应液的使用量参考? ? ? EdU培养基 100 μl 150 μl 200 μl 300 μl 500 μl 2 mL 染色反应液 100 μl 150 μl 200 μl 300 μl 500 μl 2 mL ? ? ?注：1）*表示贴壁细胞通常采用的培养容器，EdU培养基与染色反应液用量以覆盖细胞为宜；2）悬浮细胞EdU用量请按培养体积而定。 ? 表2??EdU孵育时间取决于细胞生长速度 细胞系 人胚胎细胞 酵母细胞 人成纤维细胞 人宫颈癌细胞 人胚肾细胞系 人神经细胞 细胞周期 ~30min ~3h ~18h ~21h ～25h ~5d 孵育时间 5min 20min 2h 2h 2h 1d ? ? ? ? 注：?1）EdU孵育时间取决于细胞周期，一般为细胞周期的1/10至1/5； 2）*考虑到细胞培养基、温度、湿度、光线等其他因素的影响，细胞周期会有所变化，但大多数细胞系可采用2h孵育时间。 ? 表3??Apollo?染色反应液的配置（现用现配） 配制顺序 1 去离子水 469 μL 938 μL 4.69 mL 9.38 mL 2 Apollo?反应缓冲液?(试剂B) 25 μL 50 μL 250 μL 500 μL 3 Apollo?催化剂溶液?(试剂C) 5 μL 10 μL 50 μL 100 μL 4 Apollo?荧光染料溶液?(试剂D) 1.5 μL 3 μL 15 μL 30 μL 5 Apollo?缓冲添加剂??(试剂E) 5 mg 9 mg 44 mg 88 mg ? ? ? ? ? ? ? ? 注：1）*表示通常配制的Apollo?反应液的体积； 2）按顺序配制适量1X Apollo?染色反应液，以免破坏正常的反应体系(现用现配，30分钟用完)； 3）试剂E?为白色粉末，较易氧化，使用后请旋紧管盖，如试剂出现棕黄色，则需更换。 粉末较难准确称量，称量误差范围可稍微放宽，但不应超过±20%。 ? 表4??配套染料的相关波长信息 C00031 Apollo??567 550?nm 565?nm Cy3 C00041 Apollo??643 653