生物化学简明教程ppt 第三章核酸.pptVIP

主要内容：介绍核酸的分类和化学组成，重点讨论DNA和RNA的结构特征，初步认识核酸的结构特征与其功能的相关性；介绍核酸的主要理化性质和核酸研究的一般方法。 ;核酸的发现和研究历史; 1869年Miescher博士论文工作中测定淋巴细胞蛋白质组成时, 发现了不溶于稀酸和盐溶液的沉淀物, 并在所有细胞的核里都找到了此物质, 故命名核质(Nuclein)。; 1944年Avery重做1928年Griffith的细菌转化实验，证明DNA是遗传物质。; 核酸功能、分类和分布; 第一节 核酸的组成成份 ;（一）、化学组成;基本碱基结构和命名;核糖和脱氧核糖;（二）、核苷（核糖+碱基）;;几种稀有核苷酸;碱基、核苷、核苷酸的关系 ;第二节 脱氧核糖核酸的结构;DNA 的一级结构;DNA一级结构的表示法;第三节 DNA的空间结构;;（1）DNA分子由两条多聚脱氧核糖核苷酸链(简称DNA单链)组成。两条链沿着同一根轴平行盘绕，形成右手双螺旋结构。螺旋中的两条链方向相反，即其中一条链的方向为5′→3′，而另一条链的方向为3′→5′。;（2）嘌呤碱和嘧啶碱基位于螺旋的内侧，磷酸和脱氧核糖基位于螺旋外侧。碱基环平面与螺旋轴垂直，糖基环平面与碱基环平面成90°角。 ;（3）螺旋横截面的直径约为2 nm，每条链相邻两个碱基平面之间的距离为0.34 nm，每10个核苷酸形成一个螺旋，其螺矩（即螺旋旋转一圈）高度为3.4 nm。 ;（4）双螺旋的力是链间的碱基对所形成的氢键。 碱基的相互结合具有严格的配对规律，A-T，G-C结合，这种配对关系，称为碱基互补。A T间形成两个氢键，G C 间 三个氢键。 在DNA分子中，嘌呤碱基的总数与嘧啶碱基的总数相等。;（5）、大沟和小沟; 3、维持双螺旋结构稳定的因素;? 氢键 ?碱基堆集力 ?磷酸基上负电荷被胞内组蛋白或正离子中和 ?碱基处于疏水环境中;;DNA双螺旋构象的类型;第四节 DNA的三级结构; 超螺旋结构;组蛋白与DNA的结合;真核生物染色体DNA组装不同层次的结构;第六节 RNA的结构和功能;二、RNA的结构;RNA的一级结构 ;第七节 核酸的性质 ;DNA的紫外吸收光谱;三、核酸的变性和复性;分子杂交的原理示意图;核酸的变性、复性和杂交;Tm：熔解温度（melting temperature）;第八节 核酸的序列测定;反应体系组成：待测单链DNA ，模板，引物，四种dNTP(其中一种用32P/35S标记) 终止剂(ddNTP)，DNA聚合酶 Sanger发明：两次获得诺贝尔奖 分别得到ddA ddT ddG ddC结尾的片段 ;补充 核酸的衍生物; 5′-NMP 5′-NDP 5′-NTP N=A、G、C、U;;酵母tRNA Ala 的二级结构;;;;腺苷(AR) 脱氧胞苷(dCR); “稀有核苷”是由“稀有碱基”所生成的核苷。;; 超螺旋结构;正超螺旋：;(1)氨基酸接受区包含有tRNA的3’-末端和5’-末端， 3’-末端的最后3个核苷酸残基都是CCA，A为核苷。氨基酸可与其成酯，该区在蛋白质合成中起携带氨基酸的作用。(2)反密码区与氨基酸接受区相对的一般含有7个核苷酸残基的区域，其中正中的3个核苷酸残基称为反密码;(3)二氢尿嘧啶区 该区含有二氢尿嘧啶。 (4) T?C区 该区与二氢尿嘧啶区相对， 假尿嘧啶核苷—胸腺嘧啶核糖核苷环(T?C)由7个核苷酸组成，通过由5对碱基组成的双螺旋区(T?C臂)与tRNA的其余部分相连。除个别例外，几乎所有tBNA在此环中都含有T?C 。 (5)可变区 位于反密码区与T?C区之间，不同的tRNA该区变化较大。;核酸的变性是指核酸双螺旋区的多聚核苷酸链间的氢键断裂，变成单链结构的过程。;变性核酸将失去其部分或全部的生物活性。核酸的变性并不涉及磷酸二酯键的断裂，所以它的一级结构(碱基顺序)保持不变。 能够引起核酸变性的因素很多。温度升高、酸碱度改变、甲醛和尿素等的存在均可引起核酸的变性。 RNA本身只有局部的双螺旋区，所以变性行为所引起的性质变化没有DNA那样明显。;; 测序过程 1.模板与引物杂交 2.引物的延长和合成阻断 四个试管分别加入 DNA聚合酶 dNTP 标记底物 终止剂不同 ddA ddG ddC ddT 四个试管中所有产物是一系列长度只差一