培养基的常规配制程序.doc

培养基的常规配制程序 一、 H的要求 了解培养基的配制原理。 了解培养基常规配制程序。 了解培养基配制过程各环节的要求和注意事项。 二、 基本原理 正确掌握培养基基的配制方法是从事微牛物学实验工作的重要基础，由丁-微 牛物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微牛物培养基的种类也很多，它们 的配方及配制方法虽各有差界。但…般培养基的配制程序却大致相同，例如器皿 的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作 以及培养基的无菌检查等基本环节大致相向。 三、 实验材科 （一） 药晶 待配各种培养的组成成分，琼脂,lmol/LNaOH溶液,lmol/1 （升，统一用大写）HC1 溶液。 （二） 仪器 天平或台秤，高压蒸汽灭菌锅。 （三） 玻璃器皿 移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 （四） 其他物品 药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、 报纸等。 四、 实验内容 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将锥形瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含 有洗涤剂的水屮，用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸镭水冲净。移液管先用含有洗 涤剂的水浸泡。再用自来水及蒸倔水冲洗，洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱屮烘干 后备用。 灭菌前玻璃器皿的包装 培养皿的包装 培养皿由一?盖一底组成一?套。可用报纸将几套培养皿包 成一包，或者将几套培养皿直接置丁?特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培 养皿须经灭菌之后才能使用。 移液管的包装 在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)。它的作 用是避免外界及口屮杂菌吹入管内，并防止菌液等吸入口屮。寒入此小段棉花应 距管口约0. 5cm左有。棉花自身长度约1-1?5cm。塞棉花时，可用一?外圈拉直 的曲别针，将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不 使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在 长条报纸的一端，约成45度角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，右 手将移液管丿玉紧，在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠 打结，准备灭菌(见图5—1—1)。 S s I I ?????? (-)液体及I古I体培养基的配制过程 液体培养基配制 称量一般可用1/100粗天平称量配制培养基所需的各种药站。先按培养 基配方计算各成分的用虽:，然后进行准确称量。 溶化 将称好的药品置于一烧杯屮，先加入少量水(根据实验需要可用自 来水或蒸镭水)，用玻棒搅动，加热溶解。 定容待全部药品溶解后，倒入一量筒屮，加水至所需体积。如某种药 品用量太少时，可预先配成较浓溶液，然后按比例吸取一定体积溶液，加入至培 养基小。 调pH 一般用pH试纸测定培养基的pHo用剪刀剪出一小段pH试纸，然 后用银子夹取此段pH试纸，在培养基屮蘸一下，观看其pll范围，如培养基偏酸 或偏碱吋，可用lmol/1 NaOH或lmol/1 HC1溶液进行调节。调节pH时，应逐滴 加入*0H或HC1溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基屮成分。边加边搅拌, 并不时用pH试纸测试，直至达到所需pH为止。 过滤用滤纸或多层纱布过滤培养基。一般无特殊要求吋，此步可省去。 2 ?同体培养基的配制 配制固体培养慕时，应将已配好的液体培养基加热点沸，再将称好的琼脂 (1. 5%-2%)加入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底烧焦。继续加热至琼脂全部融 化，最后补足因蒸发而失去水分。 (三)培养基的分装 根据不同需要，可将己配好培养基分装入试管或锥形瓶内，分装时注意不要 使培养基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不小心，培养基沾污管口或瓶口吋, 可用锡子夹一小块脱脂棉，擦去管口或瓶口的培养基，并将脱脂棉弃去。 1 ?试管的分装 取一个玻璃漏斗，装在铁架丄，漏斗下连一根橡皮管，橡皮管下端再与另一 玻璃管相接，橡皮管的屮部加一?弹簧夹。分装时，用左手拿住空试管屮部，并将 漏斗下的玻璃管嘴插入试管内，以右手拇指及食指开放弹簧夹，屮指及无名指夹 住玻璃管嘴，使培养基直接流入试管内(图5—1—2)。 培养碁的分號 装入试管培养基的量视试管大小及需要而定，若所用试管大小为15X150 mm 吋，液体培养基可分装至试管高度1/ 4左右为宜；如分製|古|体或半同体培养基 时，在琼脂完全融化后，应趁热分装于试管屮。用于制作斜面的固体培养基的分 装量为管高1/5（约3—4ml）；半固体培养基分装量为管高的1 / 3为宜。 2 ?锥形瓶的分装 用于振荡培养微牛物用吋，可在250 ml锥形瓶屮加入50 ml的液体培养基, 若用于制作平板培养基用时，可在250 ml锥形瓶屮加入150ml培养基，然后再 加入3g琼脂粉（按2%计算）,灭菌吋瓶屮琼脂粉同吋