水产微生物 实训五 微生物培养基的配制 技能实训 培养基的配制.docVIP

技能实训 营养琼脂培养基的配制 一、技能目标 1.能够根据需要正确选用制备培养基的原料，通过配制营养琼脂培养基掌握通用培养基的制备方法。 2.能熟练操作培养基配制的相关仪器设备及规范地进行配制操作。 二、实训器材和配方 1.营养琼脂培养基配方 牛肉膏3.0g ，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂15.0～20.0g，蒸馏水1000mL，pH 7.2～7.4。 2.材料和试剂 牛肉膏、蛋白胨、Nacl、琼脂、1mol/L NaoH、1mol/L HCl。 3.仪器和用具 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、平皿、培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸气灭菌器、pH试纸（pH 5.5～9.0）、棉花、牛皮纸、记号笔、棉纱细绳、纱布等。 三、技能操作 1.称量 按培养基配方的比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯；也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品；瓶盖也不要盖错。 2.溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积。如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。 在制备时，如需用三角瓶盛固体培养基进行灭菌时，也可先将一定量的液体培养基分装于三角瓶中，然后按1.5%～2.0%的量将琼脂直接分别加入各三角瓶中，不必加热溶化，而是灭菌和加热溶化同步进行，节省时间。不可用铜或铁锅加热溶化培养基，以免离子进入培养基中，影响细菌生长。 3.调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH。如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.6。反之，用1mol/L HCl进行调节。 对于有些要求pH较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行。 pH不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。配制pH低的琼脂培养基时，若预先调好pH并在高压蒸气下灭菌，则琼脂因水解不能凝固。因此，应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性pH条件下灭菌，再调整pH。 4.过滤 需要过滤的培养基要趁热用滤纸或多层纱布过滤。一般无特殊要求的情况下，这一步可以省去(本实验无需过滤)。 5.分装 按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。 (1) 液体分装：分装高度以试管高度的l/4左右为宜。分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的一半为宜，如果是用于振荡培养用，则根据通气量的要求酌情减少；有液体培养基在灭菌后，需要补加一定量的其它无菌成分，如抗生素等，则装量一定要准确。 (2) 固体分装：分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 (3) 半固体分装：试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。 分装过程中，注意不要使培养基沾在管(瓶)口上，以免沾污棉塞而引起污染。 6.加塞 培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或硅胶帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。 7.包扎 加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道棉纱细绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。也可用市售的铝箔代替牛皮纸，省去用绳扎，而且效果好。 8.灭菌 将上述培养基以0.103 MPa，121℃，20 min 9.搁置斜面 将灭菌的试管培养基冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多)，将试管口端搁在玻棒或其它合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜(图3-31)。 10.倒平板 图3-31 摆斜面将灭过菌的培养基冷却至50℃左右时（以不烫手为宜），按照无菌操作的要求倒平板。具体操作如下：先用左手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管(瓶)塞，将试管塞或瓶塞轻轻地拔出（如果试管内或三角瓶内的培养基一次用完，管塞或瓶塞则不必夹在手中，直接用右