人类疾病的分子基础第四次基因分析iib-hxj2015q.pdfVIP

蛋白检测技术 • 免疫组化（IHC） • 免疫荧光（IFA） • 免疫电镜 • 流式细胞术 • 酶联免疫法 （ELISA） • 放射免疫法（RIA） • Western Blotting IHC基本步骤 固定、包埋、制片 预处理：抑制内源性酶、抗原修复 免疫染色 加I抗→PBS洗片→加辣根酶标记标记II抗→ PBS洗片→加底物显色 复染、封片 Western Blotting 化学发光底物 PVDF膜 Western blotting 1. sample preparation, 2. Gel electrophoresis, 3. transfer from gel to membrane, 4. immunostain of the blot a) ubation with the primary antibody b) Wash membrane c) ubation with secondary antibody d) Development methods：X- Digital images 流式细胞术(Flow Cytometry, FCM) • 流式细胞术是对液流中排成单列的细胞或其它生物微 粒逐个进行快速定量分析和分选的技术，它集计算机 技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学 于一体，不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状，还 可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA 、RNA含量 等，可对群体细胞在单细胞水平上进行多参数定量分 析，能够分类收集(分选)某一亚群细胞，分选纯度＞ 95% 。在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物 学等学科广泛应用。 流式细胞术结果 双色标记 单色标记 蛋白组学研究方法 • 双向电泳/质谱 • 蛋白芯片 等电点 分子量 蛋白与DNA相互作用研究方法 • electrophoretic mobility shift assays （EMSA） • DNAse I footprinting • chromatin immunoprecipitation, or ChIP • ChIP-on -chip • ChIP-seq Electrophoretic mobility shift assay (EMSA) • also referred as a gel shift assay, gel mobility shift assay, band shift assay, or gel retardation assay • 通过核酸在凝胶中电泳迁移率的变化了解DNA或RNA与 蛋白的结合 mobility shift assay DNA footprinting • DNA footprinting is a method of investigating the sequence specificity of DNA-binding proteins in vitro. • The simplest application of this technique is to assess whether a given protein binds to a region of interest within a DNA molecule. DNA footprinting 在部分消化条件下形 成不同大小的片段