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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1022—2001 出口食品中霍乱弧菌检验方法 Method for the determination of vibriocholerae in food for export 2W12-30发布 2W12-30发布 200276-01 实施 雷家篇魄疑蠢鬆曾发布 sn/t 1022-2001 前 言 本标准足按照GB/T 1.1-1993（标准化工作导则 第1单元:标准的起草与表述规则 第1部分: 标准编写的基本虎定》的要求组写的.其中技术路线茅同引用美国食品与药品彎理局（FDA）细歯学分 析手册（1995年笫8版）中的方法? 本标准的附录A足标准的附录。 本标准由国家认证认时监督管理委员会提出并归口. 本标准起炖单位；中华人民共和国辽宁岀人境检验检疫局. 本标准主要起华人:唐守亭、曹际娟.马勇? 本标准首次发布. 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1022-2001出口食品中霍乱弧菌检验方法 SN/T 1022-2001 Method for the determinatinn nf vihrincholerae in food for export 1范围 本标准规定了出口食品中霍乱弧菌的检验方法. 本标准适用于出口水产品及其他食品的检喩. 2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文.本床准出版时?所示版本均 为有效?所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准眾新版本的可能性。 SN 0330—1994岀口食品中微生物学检验通则 3抽样 31抽样数It及抽样方法按SN 0330逬行. 2试样制备 从混合样品中取出代表性样品?将可食部分（去除贝壳）充分混匀?用四分法缩分岀不小于500g作 为试样，装入灭茵容器内，加封后标明标记. 3 3试样保存 冷冻样品于一】8匸保存. 冷藏样品于+4 C保存.24 h内检验? 4设备和材料 41 均质器 8 000 r/min-10 000 r/min.附 500 mL 均质杯? 2恒温培养箱：3（TC?60 Co 4.3显微镜? 4?4试管架? 4?5微生物实验室通用玻璃器皿、移液管、培养皿铮. 5培养基和试剂 1碱性蛋白联水（APW） 2 TCBS 琼脂 5?3三塘铁琼脂（TSI） 5-4双極铁琼脂（KIA） 5 BN,琼脂 5?6特氨酸葡萄植斜面琼脂（AGS） 5.7 HuCh-Leikon 葡萄斯肉汤（HLGI3） 5?8赖氮酸脱股函肉汤（Moeller） 9 MR-VP 肉汤 2002-06-01 实施中华人民共和国国冢质昱监督蛰骏检疫总局200b 12-30 2002-06-01 实施 SN/T 1022-2001 SN/T 1022-2001 SN/T 1022 — SN/T 1022 — 2001 5-10 ONPG 陈水 5-11 Andrade氏糖类肉汤 5-12氧化醸试剂 5-13粘丝试验溶液 5-14苹兰氏染色液 5-15 5%红细絕生理盐水 5-16 50单位多粘菌索B纸片 5.17 10 pg 和 150 pgO/129 纸片 5-18縊乱弧苗诊断血清（01群及0139群） 注，培养基和试剂的配创见附录A（标准的附最）. 6检验步骤 檢验步驟见图1所示. 图1霍乱弧菌检验步驟图 1增茵 称取检样25 g,加入装有225 mL域性蛋白腺水增菌液（APW）的广口瓶内°固体样品应以均质器 8 000 r/min?10 000 r/min打碎，或以剪刀充分剪碎?（36±1）C培养6 h?8 h和16 h?24 h° 如为牡蛎样品，应同样制备另一份检样，匱于APW中,42C培养6 h?8 h和16 h?24 h。 2分离 以3 mm?5 mm接种环取6 h?8 h和16 h?24 h壊菌培养液的表面生长物一环分别划线接种 TCBS琼脂平板至少各一个，于（36土 1）C培养18 h?24 h. 在TCBS琼脂上，典型的花乱弧函菌落为大的?光汛黄色.稍平?具有不透明中心和半透明的边缘. 6-3初步鉴定 6?3-1用接种环挑取TCBS琼脂平板上2?5个可疑菌落，划线于TN 琼脂上?（36±】〉匸培养12 h ?18h. 6. 3-2以无菌白色滤纸沾取「2琼脂表面培养物,滴加氧化酶试剂进行舗化的试验。 3-3以接种环取氣化矚阳性的培养物于0.5%去氣胆酸钠液滴中?进行粘丝试验＞ 6?3?4以接种计取氧化酶和粘丝试验阳性的培养物?接种TSLKIA和AGS,穿剌底层并划线斜面。 6.3.5以接种计取上项相同培养物接种GN。和TiN肉汤.、 6? 3? 6 将 TSI.K1 A.AGSEN。和 T,N3 肉汤于（36士】）C培养）8 h?24 h. 霍乱弧苗与相关细菌的鉴