双水相萃取 教学PPT课件.ppt

双水相萃取技术 萃取是最常用的一种液液分离方法，在制药和化 工行业应用极为普遍。但是普通的有机溶剂萃取法由 于以下原因难于应用于蛋白质分离： (1) 许多蛋白质都有极强的亲水性，不溶于有机溶 剂； (2) 蛋白质在有机溶剂相中易变性失活。 1896 年 Beijerinck 观察到当把明胶与琼脂或把明胶和可 溶 性淀粉的水溶液混合时，先得到一混浊不透明的溶 液，随后分成两相，上相含有大部分明胶，下相含有 大部分琼脂 ( 或可溶性淀粉 ) 。 60 年代，瑞典 Lund 大学的 Albertsson P A 等人首先将双 水相系统应用于萃取技术。 70 年代，德国将此技术应用于从细胞液中提取酶和蛋 白质，大大改善了酶的提取效果。 目前，仍然停留于实验室阶段，没有一套完善的理论 来解释生物大分子在体系中分配机理。工业化的例子 不多，原因在于成本过高，使技术上的优势被削弱 。 双水相萃取法 是利用物质 在 互不相溶的两水相间 分配系 数的差异来进行萃取的方法。 双水相系统可将水溶性的酶、 蛋白质等生物活性物质从一个 水相转移到另一水相中。 2.2 ％的葡聚糖水溶 液与等体积的 0.72 ％ 甲基纤维素钠的水溶 液相混合并静置后， 可得到两个粘稠的液 层，下层含有大部分 葡聚糖．上层含有大 部分甲基纤维素纳， 两相中 98 ％以上的 成分是水。 一、双水相的形成 互不溶性，形成两个水 相，两种聚合物分别富 集于上下两相； 复合凝聚，也形成两个 水相，但两种高聚物主 要集中于一相。另一项 几乎为水； 完全互溶形成均相的高 聚物水溶液。 高聚物水溶液的混合 双水相系统的形成在于 聚合物的不相溶性产生的空间障碍 作用 。 两个亲水成分的非互溶性，通常来源于各自分子结构上的 不同所产生的相互排斥作用。相反两种高聚物如果产生引 力则会形成互溶或者复合凝聚。 双水相系统也可由聚合物和无机盐之间。只要浓度达到一 定值，也 会形成两相，即聚合物 - 盐双水相体系，成相机理 尚不清楚，一 种解释为“盐析”作用。 双水相形成机理 一、双水相的形成 不相溶性是一普遍现象，其溶剂也不一定是水，也可 能是有机溶剂。 如果多种不相溶的聚合物混在一起，就可得到多相体 系，如硫酸葡聚糖、葡聚糖、羟丙基葡聚糖和聚乙二 醇相混时，可形成四相体系。 与溶剂萃取比较，双水相的两相性质差别小（密度和 折射率），有时难以看到界面。 生化工程中广泛应用的双 水相体系：聚乙二醇 (PEG)/ 葡聚糖 (Dex) 体系， PEG/ 盐等体系。 分离某一生物大分子，两 相系统的选择必须有利于 目的物的萃取和分离，同 时又要兼顾到聚合物的物 理性质。如甲基纤维素和 聚乙烯醇，因其粘度太高 而限制了它们的应用。 PEG 和 Dex 团其无毒性和 良好的可调性广泛应用。 二、相平衡和混溶性 相 图 M ′ A T ′ B ′ B 精确配制 43.00% （ g/ml ）左右的 (NH 4 ) 2 SO 4 溶液，并测其 密度。 精确称取 PEG 400 溶液 0.700g 于试管中，按表格中所列第 一号数据，用吸管加入 0.5 mlH 2 O （ H 2 O 的密度以 1g/ml 计） 缓慢滴入已配制好的 (NH 4 ) 2 SO 4 溶液，并不断在混合器上 混合，观察溶液的澄清程度，直至试管内溶液开始出现混 浊为止。记录 (NH 4 ) 2 SO 4 的加量（ ml ），根据密度值求出 重量（ g ），然后，按下表所列的第 2 号数据加入 H 2 O ，使 其澄清（加 H 2 O 量根据数据点的密集程度控制），继续向 试管中滴加 (NH 4 ) 2 SO 4 溶液，使其再次达到混浊，如此反 复操作，计算每次达到混浊时， PEG 和 (NH 4 ) 2 SO 4 在系统 总量中的重量百分比（ % ），将 PEG 的百分浓度为纵坐标， (NH 4 ) 2 SO 4 的百分浓度为横坐标作图，即得到一条双节线 的相图。 相图的制作 次数 H 2 O 加量 （ g ） (NH 4 ) 2 SO 4 溶液 加量 纯 (NH 4 ) 2 SO 4 累计量 溶液累计 总量（ g ） PEG 400 （ % ） (NH 4 ) 2 SO 4 （ % ） ml g 1 0.5 2 0.5