凋落物plfa取样和处理方法.docVIP

凋落物和土壤前处理 取样：每个次小区分别取1袋米老排凋落物和1袋杉木凋落物，每个网袋单独装入一个塑料袋；同时用土钻取网袋下面0-10cm土壤装入自封袋。共36个网袋+36个土样。网袋和土壤放在装有冰块的冰盒带回实验室。 凋落物前处理： 1，混合：凋落物带回实验室后，用剪刀剪碎混合，分成三份，一份-20℃冷藏做PLFA，一份4℃保鲜做凋落物酶，另一份烘干称重计算分解速率。 2，脱水：把-20℃冷藏的凋落物放入冷冻干燥机脱水（-80℃），24小时左右 3，粉碎： 脱水之后的凋落物用球磨机粉碎，装入自封袋，封好袋口，-20℃冷冻。 4，运输：把凋落物和土壤样品装入放有冰块的大冰盒带到广州。 5，实验时每个样品用量为0.1g（华南植物园），其他程序与土壤PLFA一样。 土壤前处理：带回实验室的土壤人工挑拣出石子，细根等，然后混合放在-20℃冷冻带到广州。 具体实验步骤： 1、 凋落物样品用球磨机粉碎（10 μm） 2、 称取冷冻干燥后的凋落物样品（250±1 mg）于玻璃离心管中（25 ml），用磷酸钾溶液（50 mmol l-1, pH 7.4）1.6 ml 、甲醇4 ml、氯仿 2 ml； 3、 涡旋30s，超声2 min，在37℃下温育30min，然后离心（800×g），将上层清液倒入50 ml分液漏斗中。然后再重复浸提一次，合并两次上层清液。 4、 向分液漏斗中再加入4 ml氯仿