兽医实验室诊断 酶联免疫吸附实验 50 酶联免疫吸附实验.pptVIP

兽医实验室诊断技术 主讲：汤起武 百年生机 为时养器 酶联免疫吸附实验CONTENTS 01 原理 02 操作方法 原理 Part-1 原理 一 酶联免疫吸附实验（ELISA）概述 酶联免疫吸附试验，简称ELISA，是实验室最常用的检测方法。 酶是能够催化化学反应的特殊蛋白质，其催化效力超过目前所有人造催化剂。酶标记抗原或抗体以后，既不影响抗原抗体反应的特异性，也不改变酶本身的活性。因此ELISA具有准确性高、检测时间短、价格低廉、判断结果有客观标准、结果便于记录和保存等优点，适合于大批标本的检测，广泛应用于食品安全检测、医疗检测以及免疫实验分析等领域。 原理 一 间接ELISA的基本原理 其原理是将抗原连接到固相载体上，样品中待测抗体与之结合成固相抗原受检抗体复合物，再用酶标二抗（针对受检抗体的抗体）与固相免疫复合物中的抗体结合，形成固相抗原-受检抗体- 酶标二抗复合物，可用目测或用分光光度计定量测定加底物后的显色程度，确定待测抗体含量。 操作方法 Part-2 操作方法 二 (一)实验准备： 操作方法 二 （二）：基本实验步骤 操作方法 二 （三）、基本操作方法 操作方法 二 四：结果判定 操作方法 二 （五）、注意事项 ELISA的比色测定主要由酶标仪进行。此处强调以下几点： （1）试剂盒从冷藏环境中取出时，必须平衡至室温后，方可开封启用。 （2）酶标仪不应安置在阳光或强光照射下，室温宜在15－30℃，使用前先预热仪器15－30分钟，测读结果更稳定。各种酶标仪性能不同，使用前应详细阅读说明书。 （3）比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体，然后将板正确放入比色架中，以免锈蚀酶标仪比色架。 （4）比色测定时，一定要注意酶标仪的波长是否已调至合适或所用滤光片是否正确。 （5）加样时注意事项：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。 感谢您的观看 * *