生物化学实验（整理版）.ppt

【实验步骤】 1．? DNA的分离纯化： ?? （1）将新鲜猪肝用0.14 mol/LNaCl-0.15mol／ＬEDTA溶液洗去血液，剪碎，加入50 ml0.14 mol/LNaCl-0.15mol／ＬEDTA溶液,置匀浆器中研磨.待研磨成糊状后，将糊状物离心10min(4000r/min)，弃去上清液，沉 淀用0.14 mol/LNaCl-0.15mol／ＬEDTA溶液洗二、三次。所得沉淀为脱氧核糖核蛋白制品。 ?? （2）向上述沉淀物加入0.14 mol/LNaCl-0.15mol／ＬEDTA溶液，使总体积为44ml，然后滴加25%SDS溶液3ml，边加边搅拌。加毕，置60℃水浴保温 10min(不停搅拌)溶液变得粘稠并略透明，取出冷至室温。此步操作 系使核酸与蛋白质分离。 （3）加入5mol／ＬNaCl溶液10ml，使NaCl最终浓度达到1mol/L，搅拌10min，加入约一倍体积的氯仿-异戊醇混合液，振摇 20min，离心10min(4000r/min )。去掉沉淀，上层清夜徐徐加入1．5—2倍95%乙醇，DNA沉淀即析出，用玻棒慢慢搅动，则DNA丝状物即缠在玻棒上。 ?? （4）将DNA粗品置于27ml0.15mol/LNaCl-0.0015mol/柠檬酸三钠溶液中，再加入3ml1.5mol