4.1 单克隆抗体制备原理.pdf

第四章 单克隆抗体 第一节 单抗制备的原理 细胞融合最重要的应用是什么？那就是单克隆抗体的制备，单克隆抗体结构 一致，氨基酸序列一致，只识别某一特定抗原决定簇，特异性强，可以标准化大 量生产。单克隆抗体主要有两个方向的应用，一是用于免疫学检测，一是用于治 疗性抗体药物的研制。这两个方向都是现代生物产业最重要的发展方向，对免疫 学、医学和农业等学科的发展有着极其重要的支撑作用。 多克隆抗体是指由多个 B 细胞克隆产生的抗体，可识别多种抗原表位，是一 组单克隆抗体混合的产物，可直接由抗原免疫获得。多克隆抗体虽然在特异性上 不如单克隆抗体，但是它制备简单、效价高、捕获力强，仍然是基础研究和诊断 领域广泛使用的有效工具。多克隆抗体主要存在于免疫后的机体血清中，又称抗 血清。 由于这种抗体是针对多种抗原表位的，所以特异性不高，其应用也受到 一定的限制。 单克隆抗体是指由单一 B 细胞克隆产生的只识别单一抗原表位的抗体，简称 单抗。单抗氨基酸序列一致，高度专一，容易纯化，可用在免疫检测和特异性治 疗等各个方面。传统的单抗制备技术主要是 B 细胞杂交瘤技术，随着现代生物技 术的发展，现在已经有抗体库技术、基因工程技术和 B 细胞永生化等多种技术可 用于单抗的制备。 我们将从以下三个方面介绍单抗制备的原理，一是单抗制备的免疫学原理， 二是细胞学原理，三是杂交细胞的筛选原理。 单抗制备的免疫学原理：哺乳动物机体具有一套复杂的防御系统来保护自己， 其中一个重要的防御机制就是体液免疫。外来抗原刺激诱导机体免疫系统活化， B 淋巴细胞增殖并转化为浆细胞，浆细胞分泌抗体 （图1），抗体在其他免疫蛋白 的帮助下，可以清除或中和抗原。 图 1 乳动物机体具有一套复杂的防御系统来保护自己 对于抗原的免疫刺激，每一个淋巴细胞都会合成并分泌一种单一的抗体，这 些抗体可以高度特异地识别免疫抗原的特定区域，这个区域即抗原表位，也叫抗 原决定簇。一般来说，大分子抗原有多个表位抗原，每一个活化的淋巴细胞克隆 只识别单一的表位，只产生一种针对某一个抗原表位的特异性抗体 （图2）。一 个多表位抗原可刺激多个 B 细胞克隆活化，产生多种单克隆抗体。 图2 针对某一个抗原表位的特异性抗体 前面介绍的是单抗制备的免疫学原理，现在我们来看看细胞学原理。致敏的 B 淋巴细胞可以分泌特异性抗体，但是，B 淋巴细胞在体外不能长期培养。骨髓 瘤细胞可在体外长期培养，但是不能分泌抗体。如果我们将 B 淋巴细胞与骨髓瘤 细胞融合，会得到什么样的结果呢？那就是可得到既可体外长期培养，又可以分 泌抗体的杂交瘤细胞。将分离纯化的单克隆杂交瘤细胞扩大培养，即可源源不断 地生产得到我们所需要的单克隆抗体 （图3）。 图 3 单克隆抗体制备的细胞学原理 在这里，我们要稍微介绍一下骨髓瘤细胞的选择。并不是所有的骨髓瘤细胞 都可以用于单抗的制备，前人的经验告诉我们，只有满足以下条件的细胞才能使 用： （1）能在体外连续培养，而且最好是生长的比较快的那种，倍增期短于24 小时； （2）要有基因缺陷，比如缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（就是 HGPRT 阴性），这个特性利于后续的选择性筛选； （3）克隆效应高，就是单个细胞长成一团细胞的能力要强； （4）在动物中致肿瘤性强，这对于后续的腹水型抗体的制备有利； （5）与小鼠淋巴细胞融合率要非常高； （6）最后是，骨髓瘤细胞本身不合成免疫球蛋白，也不能抑制杂交瘤细胞中的 免疫球蛋白的合成。 目前，满足这些条件的常用的小鼠骨髓瘤细胞有 Sp2/0、NS-1 和