13 【终版】RNA的提取和电泳检测.pdf

实时荧光定量PCR方法检测 小鼠脾细胞特定基因的表达 总RNA的提取和电泳检测 1 实验背景 为什么提取RNA ？  目的基因的获得  RT-PCR 第一讲总RNA的提取和电泳检测  Northern杂交  cDNA克隆  差异显示 1 实验背景 目标产物 分离纯化 蛋白质, DNA, RNA, 糖类, 脂质, 多肽, 小 杂质 分子物质等 1 实验背景 生物大分子提取的依据 分子量 形态 物理化 学性质 电荷 生物分子 溶解度 间差异 生物学 亲和性 性质 1 实验背景 生物大分子提取流程 原料的选择、前处理 粗提 样品分析 与检测 纯化 浓缩和保存 1 实验背景  生物大分子提取的一般原则 一级结构 一 完整性 高级结构 般 原 纯度 则 产量 效率 经济 2 实验设计 mRNA的特性  单链线性分子  核蛋白体  核糖核酸，不稳定性，易被降解（2,3位有一OH，反应活 性高）  均一性: rRNA （28S、18S、5.8S、5S，占80%） mRNA （1%～5%） tRNA和小分子RNA （10%～15%)  容易被RNA酶（RNase）破坏 2 实验设计 提取RNA的来源  细菌  酵母  血液  动植物组织 （小鼠脾细胞）  培养细胞  同一来源的不同组织（如植物幼嫩叶片、成熟根和茎等） 如何从脾细胞中提取总RNA？ 2 实验设计 R