2021生物实验报告-ABO血型鉴定.docxVIP

生物实验报告 姓名： 班级 ： 日期： 同组者： 实验序号 ： 实验题目 ： ABO 血型鉴定 实验目的 ： 1.掌握血涂片的制作，了解各种血细胞的结构特点 2.掌握 ABO 血型的鉴定方法 实验原理 ：人类的 ABO血型遗传是由基因决定的。很多時间，一 个基因只包含两个等位基因。但是，控制血型的基因 I 则有三个不同等位基因。即同一时间内，一个位点 可以有其中任何两个等位基因出现。 等位基因 A 使红血球产生抗原 A； 等位基因 B 使红血球产生抗原 B； 等位基因 O使红血球不产生抗原； 等位基因 A和 B为等显性， O对 A和 B均为隐性。 ＡＢＯ血型鉴定的原理是根据红细胞上有或无Ａ抗 原和Ｂ抗原或 AB 抗原，将血型分为Ａ型、Ｂ型、Ａ Ｂ型及Ｏ型四种。本实验采用红细胞凝集试验，用已 知抗Ａ和抗Ｂ单克隆抗体来测定红细胞上有无相应 的Ａ抗原或Ｂ抗原或 AB抗原来确定 ABO血型。 抗原抗体反应——在 ABO血型系统中，红细胞膜上抗 原分 A 和 B 两种抗原，而血清抗体分抗 A 和抗 B 两种 抗体。 A抗原加抗 A 单克隆抗体或 B抗原加抗 B单克 隆抗体，则产生凝集现象→从而测知受试者红细胞膜 上有无 A或/和 B抗原→判断血型 抗体在相邻的红细胞表面抗原决定簇之间搭桥形成 肉眼可见的颗粒状凝集团块 . 实验对象 ：血液 实验器材 ：受检者血液 抗 A 、抗 B 单克隆抗体 载玻片、脱脂棉、针、酒精棉球、生物显微镜、冰 箱等。 实验方法及步骤 ： 1.血涂片的制作 用酒精棉球擦拭消毒指尖，用采血针刺破指尖或耳垂，从 采血针眼处挤出绿豆大小血滴，用清洁玻片面的一端轻轻 接触血滴，使血滴附于玻片面上（注意勿触及皮肤，否则 血在玻片上就不能成滴） 。 以左手拿该片的两端， 迅速用右手拿住另一载玻片的一端， 在左手载玻片上由前向后接触血滴，使两载玻片约成 45° 角，轻轻移动，使血滴成一直线，然后由前向后推为一均 匀的薄片。 涂片在空气中干燥后置于染色架上，滴加瑞氏染色液，使 涂片被染色液覆盖。 染 1 分钟后，再加等量的缓冲液于染色液上，浸染约 5-8 分钟此时涂片表面呈现一层古铜色。 用蒸馏水迅速冲洗，见涂片呈粉红色后，自然晾干。 2.血细胞观察 制作良好的血涂片厚薄适宜，血膜分布均匀，呈粉红色。选 一厚薄适宜部位置显微镜下观察。 先用低倍镜观察全片， 了解涂 片染色、细胞分布情况，再用高倍镜观察。 红细胞 数量最多，体积小而圆、均匀分布，呈红色的圆 盘状，边缘厚，着色较深，中央薄，着色较浅，无细胞核、 细胞器，胞质内充满血红蛋白。 白细胞 白细胞数量较红细胞数量少，但胞体大，细胞核 明显，极易与红细胞区别开。 嗜中性粒细胞 是白细胞中较多的一种，约占白细胞总数 50-70%。体积比红细胞大，主要的特征是胞质中的特殊颗 粒细小，分布均匀，着淡紫红色。胞核着深紫红色，一般 分 3—5 叶，叶间以染色质丝相连。核分叶的多少与该细胞 年龄有关，如核为杆状，则为嗜中性粒细胞的幼稚型。 嗜酸性粒细胞 比中性粒细胞略大， 数量少，约占 7%以下。 核常分两叶，着紫蓝色。主要特点是胞质内充满粗大、圆 形的颗粒，色鲜红或桔红。 嗜碱性粒细胞 数量很少， 约占 1%以下。 在一般血涂片上 不易找到，体积比上述 2 种白细胞稍小。胞质中分散着许 多大小不一的深紫蓝色颗粒。胞核形状不定 ,圆形或分叶， 也染成紫色，但染色略浅，一般都被颗粒遮盖，形状不清 淋巴细胞 数量较多，约占 20%-40%，可见中、小型，淋 巴细胞。其中小淋巴细胞最多 ,略大于红细胞。核大而圆 几乎占据整个细胞，染成深蓝紫色。胞质极少，仅在核的 一侧出现一线状天蓝色或淡蓝色的胞质。中淋巴细胞比红 细胞大，胞质较小淋巴细胞的稍多，着色较浅。核圆形或 卵圆形，位于细胞中部，也染成深蓝紫色。 单核细胞 数量少，约占 2%-8%，是细胞中体积最大的一 种，胞核呈肾形、马蹄形，常在细胞一侧，着色比淋巴细 胞浅。 血小板 为形状不规则的细胞小体， 其周围部分为浅蓝色， 中央有细小的紫色颗粒，常聚集成群，分布于红细胞之间。 高倍镜下一般只能看到成堆的紫色颗粒，在油镜下才能看 到颗粒周围的浅色胞质部分。 3.血型鉴定 标记凹载玻片：左上角写 A ，右上角写 B 。 分别吸取抗 A、抗 B 单克隆抗体各 1 滴滴于双凹载玻片左 端和右端。 采血针刺破左手无名指尖或耳垂，待血液出来后，用 2 支 毛细滴管吸取或消毒后的牙签挑取血液，分别加入到玻片 左、右两侧的单克隆抗体试剂内，并用牙签搅拌，使单克 隆抗体试剂与血液混匀。 （切勿混用毛细滴管和牙签！ ）然 后置室温下 5min 后观察结果。 肉眼观察：如果外观略呈花边状或锯齿状，看上去有沉淀， 则多为凝集；如果血滴呈均匀状态，边缘整齐，则多