羊肚菌多糖及其硫酸化衍生物的制备、结构分析与生物活性研究.pdfVIP

摘要 摘 要 羊肚菌多糖已经被证实具有许多优良的生物活性，而多糖的众多功能与其结构有着密 切的联系，因此对多糖的化学结构进行研究必将为活性功能的探究奠定基础。本研究通过 对多糖进行适当修饰来提高多糖的生物活性也是近几年研究的一大热点。本文采用超声破 碎的方法提取得到羊肚菌粗多糖并对多糖进行分离纯化获得单一组分MSP-II，然后从 MSP-II 的结构、免疫调节作用、多糖硫酸化衍生物及其抗癌活性等各方面进行了相关研究， 主要研究成果如下： 1 ITS （）采用 序列分析技术对羊肚菌菌株进行分子鉴定，鉴定结果表明该菌株为六 妹羊肚菌，即为一种新型菌种。经过超声破碎、醇沉、除蛋白、脱脂等步骤后从羊肚菌菌 丝体中提取得到粗多糖。然后，利用全自动蛋白纯化系统，在经过DEAE-纤维素柱层析和 Sephadex G-25 葡聚糖凝胶柱层析分离纯化后，获得了组分单一的多糖组分MSP-II，多糖 含量约为91.56%。利用凝胶渗透色谱对多糖分子量进行了测定，结果表明MSP-II 的分子 4 量大小为2.34×10 。 2 PMP MSP-II （）采用 柱前衍生的方法来分析羊肚菌多糖 的单糖组分。结果表明， MSP-II 主要由Ara、Glc、Gal 和GalUA 组成，并且含有少量的Man、Rha、Fuc 和GluUA。 各单糖的摩尔比为：Gal:Ara:Gal:Man:Rha:Fuc:GalUA:GluUA 34.95: 8.7:9.55:4.55:5.0: 1.45: 12.7:7.65。对羊肚菌多糖MSP-II 进行紫外全光谱扫描，扫描结果显示MSP-II 的最大 紫外吸收值为200nm 波长，而在260nm 和230nm 波长处没有吸收峰，表明MSP-II 中几 乎不含有蛋白质和核酸等物质。采用傅里叶红外光谱对MSP-II 进行结构解析，分析表明 MSP-II MSP-II β- 羊肚菌多糖 具有典型的多糖特征吸收峰。在 的结构中存在 糖苷键，已有 研究证实β-糖苷键与多糖的免疫调节活性有着密切的联系。此外MSP-II 中还存在少量的α- 1 13 糖苷键构型。利用核磁共振技术，对羊肚菌多糖MSP-II 进行分析，测定了多糖的 H 和 C NMR 1HNMR 13CNMR MSP-II 图谱。 及 图谱数据表明 的重复单元含有三种糖苷键的连接 方式，且糖残基为α-和β-构型。 （3）采用MTT 法检测羊肚菌多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7增值作用的影响，实验 结果显示羊肚菌多糖可以显著提高RAW264.7细胞的增殖，表明羊肚菌多糖可以促进小鼠 巨噬细胞的生长。采用中性红吞噬实验检测羊肚菌多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7 的吞噬 活力，实验结果显示MSP-II 能显著提高巨噬细胞的吞噬活性。采用NO 试剂盒检测羊肚菌 RAW264.7 NO NO 多糖对小鼠巨噬细胞 的 释放量，结果显示，羊肚菌多糖可以促进 的释 放，表明羊肚菌多糖可以增强小鼠巨噬细胞的免疫力。采用流式细胞仪检测羊肚菌多糖对 小鼠巨噬细胞RAW264.7 的ROS释放量影响，实验结果显示随着MSP-II 浓度的升高，ROS 释放量呈现逐渐升高的趋势，从而证明了羊肚菌多糖可以促进ROS 的释放。 （4）采用氯磺酸-吡啶法对羊肚菌多糖MSP-II 进行硫酸化修饰，得到了硫酸化衍生物。 I