化学发光法主要生产工艺.pdf

附件 2 化学发光法主要生产工艺 一、原理 化学发光免疫分析（ chemiluminescence immunoassay ， CLIA ），是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性 的免疫反应相结合，用于各种抗原、抗体、激素、酶、脂肪 酸、维生素和药物等的检测分析技术。化学发光免疫分析包 含两个部分，即免疫反应系统和化学发光分析系统。免疫反 应系统是将发光物质（在反应剂激发下生成激发态中间体） 直接标记在抗原或抗体上，或酶作用于发光底物。化学发光 分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的 氧化，形成一个激发态的中间体，当这种激发态中间体回到 稳定的基态时，同时发射出光子，利用发光信号测量仪器测 量光量子产额，该光量子产额与样品中的待测物质的量成正 比，由此可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。 二、化学发光免疫分析的类型 （一）化学发光标记免疫分析 化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析 （CLIA ）， 是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用 于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物（ AE ）。 （二）化学发光酶免疫分析 从标记免疫分析角度， 化学发光酶免疫分析 （CLEIA ）， 应属酶免疫分析，只是酶反应的底物是发光剂，操作步骤与 酶免分析完全相同：以酶标记生物活性物质（如酶标记的抗 原或抗体）进行免疫反应，免疫反应复合物上的酶再作用于 发光底物， 在信号试剂作用下发光， 用发光仪进行发光测定。 目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶（ HRP ）和碱性磷酸酶 （ALP ），它们有各自的发光底物。 （三）时间分辨荧光免疫分析（ TRFIA） 是用三价稀土离子及其螯合剂作为示踪物， 如铕 （Eu3+ ）、 铽（ Te3+ ）及钐（ Sm3+ ）、镝（ De3+ ）等代替传统的荧光 物质、放射性同位素、酶和化学发光物质，来标记抗体、抗 原、多肽、激素、核酸探针或生物活性细胞，待反应体系发 生后，用时间分辨荧光仪测定最后产物中的荧光强度，根据 荧光强度和相对荧光强度比值，判断反应体系中分析物的浓 度，达到定量分析的目的。 （四）电化学发光免疫分析（ ECLIA） 是电化学发光（ ECL ）和免疫测定相结合的产物，是一 种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，包括了 电化学和化学发光二个过程。 ECL 反应底物有两种：三氯联 吡啶钌 [ Ru （bpy ）3] 2+ 、络合物三丙胺（ TPA ）。 三、主要生产工艺（以微孔板载体的化学发光酶免疫分 析为例进行描述） （一）固相载体的制备 1．包被板的准备 准备经检验合格的包被板， 记录批号、 数目、状态标识。 常规质控项目：尺寸，外观，包装。 2 ．包被液的配制 配制包被缓冲液，加入包被的抗体或抗原至工作浓度， 混合均匀，即成所需的包被液，工作浓度的包被液应在规定时 间内使用。 常规质控项目：包被缓冲液配方， pH 值。 3 ．包被板的包被 包被液按工艺要求加入包被板。记录所包被的包被板数 量。 常规质控项目：包被体积，温度，时间，过程监控。 关键设备：包被机、天平、加样器。 4 ．洗板工作液的配制 （按各单位工艺要求， 可以不洗板） 按配方配制洗板工作液。 常规质控项目：洗板工作液配方，