高效液相色谱文献综述.pdf

高效液相色谱结合化学发光的简要介绍 （孙鑫 环境学院 Z1009006） 摘要 ：目前，高效液相色谱 (HPLC) 法由于对复杂样品中的分析物具有极高的分 离效率而成为最有效的分离方法。 将具有高灵敏度的化学发光分析法和具有高分 离效率的高效液相色谱分离法相结合已引起了国内外分析化学家的极大兴趣。 本 文简单概述了高效液相色谱化学发光的特点、 发展史、 检测原理、 化学发光反应 体系以及发展前景。 1. 引言 高效液相色谱 （high performance liquid chromatography，HPLC ）是一种具有 高效、快速及应用广泛的现代分离技术， 它是在经典液相色谱法的基础上，引 入了气相色谱法的理论和技术， 以高压输送流动相， 采用高效固定相及较高灵敏 度检测器，发展而成的现代液相色谱分析方法己经成为有机物质分析的支柱技 术，在生物化学、临床医学、食品检验、石油化工及环境污染监测等领域得到广 泛的应用， 成为分析化学家和生物化学家用以解决他们面临各种实际分析和分 离必不可缺的工具。 与经典的液相色谱法相比， 高效液相色谱法具有下列主要优 点：①应用了颗粒极细、 规则均匀的固定相， 传质阻抗小， 柱效高，分离效率高； ②采用高压输液泵输送流动相， 流速快， 一般试样的分析需数分钟， 复杂试样分 析在数十分钟内即可完成； ③广泛使用了高灵敏检测器， 大大提高了灵敏度。 高 效液相色谱仪是由储液器、 泵、进样器、 色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。 从上个世纪 70 年代以来，人们经过努力已研究和开发了多种检测器，如紫 外-可见光检测器 (UV 一 Vls) 、光电二极管阵列检测器 (PDA) 、荧光检测器 (FLD) 、 示差折光检测器 (RID) 、电化学检测器 (ECD) 、蒸发激光散射检测器 (ELSD) 、光 电导检测器 (PCD)、磁旋光检测器 (MDR) 、放射性检测器 (RD)、热离子化检测器 (TID) 、化学发光检测器 (CLD) 和质谱 (Ms)检测器等等。 随着色谱技术的发展， 结合计算机各种软件的开发， 使 HPLC 与各种检测仪 器联用。在众多的 HPLC 检测器中， 化学发光检测器 (CLD) 结构简单， 灵敏度高。 在大多数情况下，它的灵敏度比紫外一可见光检测器高 2-3 个数量级，由于它没 有光源， 不存在散射光引起的背景， 用于荧光物质检测时， 灵敏度比荧光检测器 更高，对某些物质的检测甚至可与激光诱导荧光检测器媲美，灵敏度可达 10-21 mol 的单分子水平。将高灵敏度的化学发光检测器与高分辨的高效液相色谱 (HPLC) 分离手段以适当的方式相祸合，集分离与分析之精华于一体，发展成为 一种理想的分析方法。 2. 高效液相色谱化学发光检测的原理 化学发光是指在没有任何光、 电、热的作用下， 只是由于反应体系中某种物 质 (反应物、产物、中间体或荧光物质 )的分子吸收了反应所释放的能量而由基态 跃迁至激发态，然后再从激发态返回基态， 同时将能量以光辐射的形式释放出来， 产生化学发光的现象。在固相、液相、气相反应中均能观察到化学发光。常用的 化学发光反应可归纳成两类，第一种类型，反应物 A 和 B 反应生成激发态的 C， 激发态的 C 回到基态时产生光辐射。 * A + B → C