植物病理学 实验十三 常用培养基及制作.pptVIP

菌物的培养基 ?1.1? 菌物的基本营养 水份：菌丝体含水量为70-80％，而孢子含水量是38-40％。 碳源：有机碳（糖、有机酸、醇、纤维素、蛋白质、油脂）和无机碳（CO2,碳 酸盐）。 氮源：无机氮（气态氮、硝态氮、铵态氮）；有机氮（蛋白质、蛋 白胨、氨基酸、豆饼、鱼粉、牛肉膏等）。 矿质元素：无机盐类 生长因子（growth factor）：生长物质或维生素（VB1、VB2、生 物 素、烟酸、泛酸、吡哆酸、对氨基苯甲酸等） 1.2 培养基的的类型 培养基的种类很多,据不完全统计不下几千种,植物病理实验室中常用的培养基只有几种或者十几种。培养基按组份的原料性质可以把培养基分为三类： 合成培养基（synthetic media） 培养基的成份和浓度完全知道的培养基。这种培养基可根据真菌的营养要发和实验目的来配制。主要用于研究真菌的生理和营养问题。常见的有查彼培养基。 半合成培养基（Semi-synthetic media） 半组合培养基是由成份未知的天然物质和成份已知的物质配成。如PDA中，糖已知，potato未知（品种，成熟度，栽培条件）琼脂差异。 天然培养基（Natural media） 利用含有丰富营养的天然动、植物的组织煎汁、厩肥，土壤的浸出液及土壤等培养真菌叫做天然培养基。常用的天然培养基有：大豆、牛肉、豆芽汁，胡萝卜、花生糖、豆糖、麸皮，稻糠等。 1.3 培养基的pH 普通常用的培养基，往往带有酸性，对于真菌的生长是适合的，不必调节PH值，但有时在培养时，为了防止（控制）细菌的污染，要将培养基调节成酸性的。pH值调节约5.0—6.8之间，使之既可以有利于真菌的生长发育，又可抑制细菌污染。常用NaOH、和乳酸调节pH。 1.4常用的培养基 PDA培养基（potato dextrose argar, PDA） 马铃薯 200.0 g 蔗糖 20.0 g 琼胶 18.0-20.0 g 蒸馏水 1000 ml 去皮马铃薯切片加入1000ml水中，煮沸半小时后，用纱布滤去马铃薯，加水补足1000ml,然后加糖和琼胶，加热使琼胶完全融化后，趁热过滤，分装试管或三角瓶。灭菌。 查彼（Czapek）培养液 ? 硝酸钠 2.00g 氯化钾 0.50g 硫酸铁 0.01g 蒸馏水 1000ml 磷酸氢二钾 1.00g 硫酸镁 0.50g 蔗糖 30.00g 按以上次序，将各种成分溶于水中，调节酸度（如有必要时），然后分盛试管中灭菌。为了减少沉淀，可以将磷酸盐分别灭菌，等冷却后在无菌的条件下加入培养液中。 1.8.1 灭菌的原理和方法: 干热灭菌: 165-180 ℃ 1h; 湿热灭菌: 121 ℃处理20min; 过滤灭菌：液体如含有易被高温 处理或破坏的物质，可用细菌不能通过细菌过滤器； 酸度的变化：由于某些成分的分解或氧化，培养基灭菌后的酸度会增高（pH值一般可减低0.2）； 碳水化合物的水解：糖类以及复杂的碳水化合物都容易水解，在酸性反应下更易水解，必要时考虑过滤或其它灭菌方法； 葡萄糖发生反应：高压灭菌后，葡萄糖可发生一系列不利的变化；如会使氨基酸失效，因而微生物不能生长； 沉淀物的产生：一般组合培养基中加入磷酸盐后往往就发生沉淀；合理的提高培养基的酸度，也可以减少沉淀。 玻璃器皿的灭菌； 培养基的灭菌； 土壤的灭菌：干热和湿热 标注培养基的种类和配置日期； 培养基无菌检验——取一部分培养基，分别在28和37℃的恒温箱中，72h后，观察有无微生物的生长； 培养基灭绝后酸度可能改变，再测量一下培养基的pH值； 配好并灭好菌的培养基最好在2-4℃，低温保存，或