拓展课程 课件库 项目六 马铃薯脱毒种薯生产.pptVIP

马铃薯是粮菜兼用作物。营养成分齐全，含量丰富，马铃薯及其产品的市场开发潜力大。 （一）材料选择和消毒 选择：注意品种的典型性，选取病症最轻的接近健康的植株。直接切取植株的分枝顶芽和腋芽剥离培养。切取4-6cm长的顶芽或侧芽，除去外部可见的小叶。 消毒：先用自来水冲洗1h左右，再用70%酒精处理30s，然后用10%漂白粉溶液浸泡5-10min，最后用无菌水冲洗2-3 次即可。 （二）茎尖剥离和接种 将消毒后的材料在10-40倍的双筒解剖镜下，用解剖镜剥取外部幼叶赫大的叶原基，直接露出圆点是生长点，再用解剖刀切取0.1-0.3mm，带有1-2个叶原基，并迅速接种到诱导培养基上。 解剖时注意：使茎尖迅速变干，在材料下垫上一块湿润的无菌纸也可达到保持茎尖新鲜的目的。 另外：茎尖脱毒效果与切取的茎尖大小直接相关，茎尖脱毒效果越好，但茎尖越小再生植株的形成也越困难。 （三）茎尖初代培养 （四）脱毒苗鉴定，确定核心种苗 病毒鉴定的常用方法有目测法、指示植物鉴定法和血 清法。 目测法：根据脱毒苗和带毒苗在形态、长势上差异来鉴定。 脱毒苗生长快，叶色浓，叶平展，植株健壮。 带毒苗长势弱、叶色淡，叶片出现花叶和褪绿斑。 在培养过程中应时常观察，及时将带病毒症状明显的试管苗去除。 指示植物法：常用的马铃薯病毒鉴定指示植物有苋科植物千日红和藜属植物苋色藜。 方法： 1、取被鉴定植株幼叶1～3g，置于等容积（W/V）的缓冲液（0.1mol/L磷酸钠）中研成匀浆，再在汁液中加入少许600号金刚砂，作为指示植物摩擦剂，使叶片造成小的伤口，又不破坏表皮细胞。 2、然后用棉球沾取汁液在指示叶面上轻轻涂抹几次进行接种。把接种后的植物放在温室或者防虫网内，保温15～25℃，株间与其他植物间都要留一定距离。 3、症状的表现取决于病毒性质和汁液中病毒的数量，一般需要6～8d或是几周，指示植物即可表现症状。 4、凡是出现枯斑、花叶等病毒症状的茎尖苗为带毒苗，将相应的试管苗淘汰。 （五）脱毒苗继代增殖 植物感染病毒后的主要症状表现？ 1.花叶是指叶片色泽不匀，呈深绿和浅绿相间的症状。 2.环斑：环斑是在叶片、果或茎上形成单线或同心纹的环。多数为褪色环，也有变色环。 3.畸形生长：包括各种反常的生长现象。如：丛枝、丛簇、皱缩、卷叶、肿胀、矮化。 4.坏死与变质：坏死是某些细胞组织死亡。变质是植物组织的质地变软或变硬，有的变为革质或木栓化。 一、茎尖培养脱毒方法 培养基与培养方式 二、愈伤组织脱毒 研究表明，在愈伤组织培养过程中，随着愈伤组织的迅速增生，病毒感染的程度会明显降低。 经过多次继代培养，新产生的愈伤组织的分散程度增加，染病的几率会越来越小，从愈伤组织诱导生产的试管苗，就会得到脱毒的再生植株。 原因：①细胞的增殖速度快于病毒复制的速度 ②愈伤组织细胞生产抗病毒突变，获得对 病毒感染的抗性，最终表现出脱毒现象。 三、珠心胚培养脱毒 如柑橘类多胚品种中除一个受精胚外，尚有多个有珠心细胞形成的无性胚，称为珠心胚。 珠心组织与维管束没有联系，故可以培养珠心组织得到无病毒植株。 珠心胚与维管束系统无联系，且病毒一般不通过种子传播，因此珠心胚一般也是无病毒的，通过珠心胚培养获得的再生植株也是无毒的，同时保存了母珠的遗传特性。 四、微尖嫁接技术（micrografting shoot-tip） 热处理脱毒的原理： ⑴ 某些病毒受热后不稳定，高温使这些病毒失 去活性， 可以部分地或完全地被钝化。 ⑵ 病毒进入植物细胞后，随植物细胞的DNA一起复制。 热处理钝化病毒的活性后，病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，而失去侵染的能力。 ⑶ 高温下，一方面不能生成或生成病毒很少，另一方面对 病毒的破坏作用加重，病毒颗粒生成和破坏的平衡程度受到破坏，使感染植株的病毒含量不断降低，经过一段时间，病毒自行消失而达到脱毒的目的。 ⑷热处理是一种物理效应，可加速植物细胞的分裂，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。 化学疗法 一、直接检测法： 直接观察脱毒植株生长状态是否异常，茎叶上有无特定病毒引起的可见症状，从而判断病毒是否存在。 二、指示植物(indmatingplant)法 草本指示植物------小叶嫁接法 草本指示植物------汁液涂抹法 取待测植物幼叶1-3g，加少量的水和缓冲液磨成匀浆。 在指示植物上涂上一薄层500-600目的金刚砂用脱脂棉球蘸匀浆在叶片上轻轻摩擦，以汁液进入叶片表细胞而又不