兽药残留量的检验要点 .pptxVIP

本资料来源;4.1 兽药与兽药残留 （研究背景、兽药残留产生的原因、类型、危害） 4.2 水产品中氯霉素的检验 （对虾中氯霉素含量的竞争性ELISA法检测） 4.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验 （猪组织中盐酸克伦特罗的GS/MS法检测、猪组织中盐酸克伦特罗的ELISA法检测 ）; 兽药：预防和治疗畜禽疾病的药物；促进生长、提高生产性能、改善动物性食品的品质；也包括一些化学的、生物的动物保健品或饲料添加剂。 现代化的动物集中饲养，经常需要使用抗生素或其他药物来控制可能爆发的疾病，同时有效使用兽药可以在很大程度上提高动物对饲料的利用率。;1、研究背景; 抗生素类：氯霉素、四环素、土霉素、青霉素等； 磺胺类：磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶等； 呋喃类：呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等； 激素和β-兴奋剂：盐酸克伦特罗、己烯雌酚、孕酮等； 抗寄生虫类：左旋咪唑、苯丙咪唑、克并咪唑、克球酚、吡喹酮等。; 非法使用违禁或淘汰药物； 不遵守休药期规定； 滥用药物； 违背有关标签的规定； 屠宰前用药。; 毒性损害; 引发过敏反应； 导致病原菌产生耐药性; 破坏微生态平衡，导致二重感染; 致畸、致癌、致突变作用; 影响生态环境； 影响畜牧业的发展。; 筛选方法; GC灵敏度较高，但易出现假阳性、阳性结果需进一步确证；HPLC操作简单，但灵敏度不高；ELISA简单、快速、灵敏度，但容易产生假阳性，一般只适用进行样品粗筛，阳性结果需进行确证；目前灵敏度较高、确证率较好的是GC/MS、GS-MS/MS 。; 氯霉素（chloramphenicol，CAP）是由委内瑞拉链丝菌产生的一种光谱抗生素。CAP对造血系统有毒性反应，是一种禁用药。; 酶联免疫吸附试验（ELISA） 竞争性ELISA法的基本原理 竞争性ELISA法检测对虾中氯霉素含量的实验设计 （课程实验） 分析和讨论;1、酶联免疫吸附试验（ELISA）;1、酶联免疫吸附试验（ELISA）;基本原理： 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性； 使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶活性； 结合物与相应的抗原或抗体反应后，结合的酶仍能催化底物生产有色物质生成，而颜色的深浅可定量抗体或抗原的含量。;图4-2 竞争性酶联免疫吸附试验法测抗原的基本原理示意图; 酶标抗原与样品或标准体中的非标记抗原（氯霉素）具有相同的与抗体结合的能力，两者竞争与固相载体包被的抗体结合。洗涤多余的酶标抗原，加酶反应的底物显色后根据颜色的深浅进行定量。 在整个反应当中，样品中氯霉素含量越多，反应显色就越淡。反之，样品中氯霉素含量越少，则显色越深。; 实验方案设计：为了达到某种特定的目的，使用多种实验试剂、仪器和设备，按照可行的实验原理，列出实验的操作顺序、确定各步骤的操作方法，列出必须的注意事项。;1）实验目的：进一步学习酶联免疫试验法的基本原理和实验方法，确实掌握酶联免疫吸附试验法测定虾肉中氯霉素含量的基本原理、实验方法和结果的分析。 ;图4-2 竞争性酶联免疫吸附试验法测抗原的基本原理示意图; 氯霉素检测试剂盒;4）主要仪器：简易的萃取设备、氮吹仪、离心机、酶标分析仪。 ;4、实验步骤;（2）样品制备;（3）操作步骤;5、结果处理 所测得的标准吸光值和样品吸光值（B）除以第一个标准（零标准）的吸光值（B0）再乘以100。 以B/B0的百分数值为纵坐标，以标样浓度（ppb）为横坐标，绘制标准半对数曲线。 根据每个样品的B/B0的百分数值就可从曲线上读出相对应样品的浓度（ppb）。 根据标准曲线所得出的样品浓度乘以样品稀释倍数计算出样品中氯霉素的实际浓度，最后的结果用“μg/kg”单位表示。; 6、注意事项 使用前先将取出置于室温下，回温30min。回温后，取出所需微量测试孔条，将剩余板条立即放回铝箔袋中用胶带封好，置于4℃保存。 浓缩萃取稀释液和浓缩洗涤液使用前必须稀释。 每次吸取不同的液体时一定要换移液枪的吸头。 加样时必须小心勿溅出微孔外，以免造成其他微孔的污染，加样品或试剂时枪头请勿接触微孔，不可产生气泡。 洗涤必须充分，重复3次。 温育时，要盖上塑料片或标签纸，置于暗处，温育时间不够不要随意取出；显色后尽快比色。 试剂盒较贵且量很少，准确量取，不要造成浪费。;7、分析与讨论; 盐酸克伦特罗 （ clenbuterol，CLB）是一种选择性β2-肾上素受体激动剂（简称β-兴奋剂），是国家按兴奋剂管理的药品，为人、畜呼吸系统药物（氨哮素、克喘素） 。 ;4.3.1 盐酸克伦特罗概述;; 克伦特罗的检验方法：HPLC、GC-MS、毛细管区带电泳法和免疫分析法。;4.3.2 猪组织中盐酸克伦特罗的检验—GS/M