植物常用培养基附加配制说明.doc

备注：培养基和激素母液配制方法 母液配制时，先向容量瓶中注入1/3定容体积的蒸馆水，再一一称取各种盐放入 烧杯中溶解，装入容量瓶， 不得一次称取所有盐，混合溶解！在配制大量母液时，氯化钙最后加入。 200XFe盐溶液 称取1.39g FeSO4.7H2O溶于水(A液)；称取1.865 g Na2.EDTA溶于热水(B液)； 将A液缓慢倒入正在加热的B液中，加水接近250ml,煮沸，混合液颜色变深，冷却 到室温，定容到250ml后，置于棕色试剂瓶内49保存。 0.5mg/mI 2,4?D母液的配法 称取50mg 2,4-D,置于小烧杯内；加少量无水乙醇或95%乙醇使之完全溶解; 加水定容至100ml, 4°C保存。如果出现沉淀，需要重新配置。 0.5mg/ml a-NAA 母液的配法 称取lOOmgNAA置于小烧杯内；用1N的KOH溶液溶解NAA；用水定容至200m 0.5mg/ml 6-BA母液的配法 称取lOOmg 6?BA置于小烧杯中；加少量的浓盐酸，用玻棒研磨成糊状，再加入少 量浓盐酸，使之完全溶解；用水稀释并定容至200ml, 4°C保存。 lOOmM乙酰丁香酮(As)的配制 称取196.2mg As,用5ml DMSO直接溶解，再加水定容至10ml,过滤灭菌后, 分装入无菌小管，-2(TC冰冻保存。使用前加入灭菌培养基。 (7) 0. 5mg/ml KT 和 ABT 的配法 称取50mg kenetin或ABT生根粉，先用少量IN KOH溶解，再用水稀释定容至 100ml, 4°C保存。 (8)其他附加物的溶解及配制 A、 称取吗啡乙磺酸(MES) 5g溶于水中，定容至lOmLo 49保存。 B、 称取lg L?半胱氨酸(Cys)溶于2mL 0.2mol/L或10%的NaOH溶液，用蒸馆 水稀释定容至10mL,现用配制。4C保存。 C、 称取850mg硝酸银，用蒸馅水溶解后定容至lOOmLo 4C保存。 D、 头抱霉素(cefotaxime) 2500mg,用蒸馆水溶解后定容至10mL。4°C保存。 E、 潮霉素(Hyg B),商品已溶解，筛选时一般加5、8、12mg/L梯度浓度。 植物培养的其他相关知识： 培养基culture medium是植物组织培养的重要基质。在离体培 养条件下，不同种植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物 不同部位的组织对营养的要求也不相同，只有满足了它们各自的特殊 要求，它们才能很好地生长。因此，没有一种培养基能够适合一切类 型的植物组织或器官，在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一 合适的培养基，培养才有可能成功。在植物组织培养历史进程中，事 实上也紧密地伴随着培养基的研制史。对植物的营养要求的不断认识, 对已有培养基的改进，或者将新发现的植物激素、新的有益成分应川 于培养基之中，都大大促进了组织培养研究的迅速发展，取得越來越 多的成功。 一、培养基的种类和成分 （一） 培养基的种类 培养基的名称，一直根据沿用的习惯。多数以发明人的名字來命名， 如White培养基，Murashige和Skoog培养基（简称MS培养基）,也有 对某些成分进行改良称作改良培养基， 目前国际上流行的培养基有几十种，常用的培养基及特点如下：（1）MS 培养基 它是1962年由Muwshige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。 特点是无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液。其养分的数量 和比例较合适，可满足植物的营养和生理需要。它的硝酸盐含量较其 他培养基为高，广泛地川于植物的器官、花药、细胞和原牛质体培养, 效果良好。有些培养基是由它演变而來的。（2）B5培养基 是1968年 由Gamborg等为培养大豆根细胞而设计的。其主要特点是含有较低的 鞍，这可能对不少培养物的牛长有抑制作川。从实践得知有些植物在 B5培养基上生长更适宜，如双子叶植物特别是木本植物。（3）White 培养基 是1943年由White为培养番茄根尖而设计的。1963年又作了 改良，称作White改良培养基，提高了 MgS04的浓度和增加了硼素。 其特点是无机盐数量较低，适于生根培养。（4）N6培养基 是1974年 朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。其特点是成分较简 单，KN03和（NH4）2S04含量高。在国内已广泛应用于小麦、水稻及其 他植物的花药培养和其他组织培养。（5） KM-8P培养基 它是1974年 为原牛质体培养而设计的。其特点是有机成分较复杂，它包括了所有 的单糖和维牛素，广泛川于原牛质融合的培养。常川培养配方见表3-E （二） 、培养基的成分 培养基的成分主要可以分水、无机盐、有机物、天然复合物、培养体 的支持材料等五大类。 水 水是植物原牛质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。它 是牛命活动过