2021植物基因组DNA的提取.pptVIP

第一部分 植物基因组 DNA 的提取 一、实验目的和要求 1 、学习并掌握植物基因组 DNA 的提取原理和方法； 2 、了解琼脂糖凝胶电泳检测核酸的原理和操作； 3 、学习并掌握对电泳检测基因组 DNA 结果的初步分析。 二、实验基本原理 植物基因组 DNA 的提取方法就其提取原理主要有二种：十六烷基三乙基溴 化铵（ CTAB) 法、十二烷基硫酸钠 (SDS) 法。十六烷基三甲基溴化铵和十二烷 基硫酸钠等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从 而使 DNA 得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性， 并使抽提液分相，因核酸 (DNA 、 RNA) 水溶性很强，经离心后即可从抽提液中 除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入无水乙醇使 DNA 沉淀，沉淀 DNA 溶于 TE 溶液中，即得植物基因组 DNA 溶液。 由于植物中的次生代谢产物 —— 多酚类化合物 可介导 DNA 降解，而 多糖 的 污染也是影响植物核酸纯度最常见的问题，这些多糖能抑制限制酶、连接酶及 DNA 聚合酶等分子生物学酶类的生物活性。传统的 CTAB-DNA 提取法 步骤多， 较烦琐， DNA 产率低，而且由于酚很难完全去除，容易影响以后的酶切等工 作的效率。 SDS 法 操作简单，温和 , 也可提取到较高分子量 DNA