荧光法测定维生素b2.ppt

荧光法测定维生素 B 2 实验 3-4 一 实验目的 1. 学习选择荧光激发和发射波长的方法 2. 掌握荧光定量分析方法 3. 掌握荧光光度计的基本构造和使用方法 二 实验原理 1 激发光谱与发射光谱 n k S h S a ? ? ? ? ? 0 ( 激发 ) ) ( h S 0 荧光 ? ? 1 S S n ? ? ? ? ? ? ? ? 振 动 弛 豫 ， 内 转 换 1 T 相 对 强 度 萘的激发和荧光光谱 激发光谱 荧光光谱 2 定量分析方法 I f = 2.3 ? I 0 ? l c = Kc ? l c 0.05 ， I f 与 c 方呈线性关系 三 荧光光度计 光 源 第一 单色器 第二 单色器 激 发 荧光 样品池 检测系统 荧光光度计示意图 2 分光系统 ( 双单色器 ) 第一单色器作用：选择激发波长 第二单色器作用：分离出荧光发射波长 1 光源 氙弧灯： 250-800 nm 连续光谱 高压汞灯：线光谱 3 样品池 四面透光 4 检测器 光电倍增管 四 实验步骤 1. 绘制维生素 B2 的激发光谱与发射光谱 200 300 400 500 600 700 800 5 10 15 20 25 30 35 40 激发光谱 发射光谱