微生物发酵技术 任务四 氨基酸的生产方法 氨基酸的生产方法.pptVIP

单元四 氨基酸类药物的发酵生产 项目一 氨基酸基本知识的学习 任务四 氨基酸的生产方法 （一）蛋白水解法 （二）化学合成法 （三）酶法 （四）直接发酵法 （五）前体发酵法 （六）氨基酸输液及其配制方法 （一）蛋白水解法 以毛发、血粉及废蚕丝等蛋白为原料，通过酸、碱或酶水解成多种氨基酸的混合物，经分离纯化获得各种氨基酸的生产方法。 目前蛋白质水解分为酸水解法、碱水解法及酶水解法。 水解法生产氨基酸的主要过程为水解、分离、精制结晶三个步骤。 目前，我国至少有6种氨基酸尚需要用提取法生产，如组氨酸、精氨酸、亮氨酸、丝氨酸、胱氨酸及酪氨酸。 （二）化学合成法 最大优点是在氨基酸的品种上不受限制，除制备天然氨基酸外，还可用于制备各种特殊结构的非天然氨基酸。 合成得到的氨基酸都是DL型外消旋体，必须经过拆分才能得到人体能够利用的L-氨基酸。 故用化学合成法生产氨基酸时，除需要考虑合成工艺条件外，还要考虑消旋异构体的拆分与D-异构体的分离，三者缺一都必会影响其应用。 现在用合成法制造的氨基酸有DL-丙氨酸、天冬酰胺、蛋氨酸、丝氨酸、色氨酸、苯丙氨酸。兼用合成法的有苏氨酸和缬氨酸。 （三）酶法 酶法是应用完整的菌体或自微生物细胞提取的酶类制备氨基酸的方法 天冬氨酸已于1973年用固定化菌体进行工业规模的生产，这是世界上最早在发酵工业上用固定化菌体的例子。 目前，能用酶法生产的氨基酸已有10多种，如：用延胡索酸和铵盐为原料，经天冬氨酸酶催化生产L-天冬氨酸；用L-天冬氨酸为原料，在天冬氨酸-β-脱羧酶作用下生产L-丙氨酸。 氨基酸 基质 微生物 产率/（g/L） 丙氨酸 天冬氨酸 Ps.dacunbe 200 天冬氨酸 延胡索酸 Enoinia aerbicda 168 酪氨酸 甲酚+丙酮酸 Enoinia aerbicda 62 多巴（二羟基苯丙氨酸） 儿茶酚+丙酮酸 Enoinia aerbicda 55 色氨酸 吲哚+丙酮酸 雷氏变形杆菌 91 5-羟基-色氨酸 5-羟基吲哚+丙酮酸 雷氏变形杆菌 28 赖氨酸 2-氨基己内酰胺 罗伦隐球酵母 140 酶法生产氨基酸 以糖类和铵盐为主要原料的培养基中培养微生物,积累特定的氨基酸。 这些方法成立的一个重要原因是使用选育成的氨基酸生物合成高能力的菌株。 （四）直接发酵法 野生菌株发酵 营养缺陷型突变株发酵 氨基酸结构类似物抗性突变株发酵 营养缺陷型兼抗性突变株发酵。 直接发酵法 1、用野生株的方法 分离的野生菌株具备积累产物的特性，可用于直接发酵（产率低）。如谷氨酸发酵。 通过转换发酵，可延伸获得其它产物。主要采用改变培养条件。如谷氨酸发酵中改变铵离子浓度、磷酸浓度，使谷氨酸转向谷氨酰胺和缬氨酸发酵。 2、用营养缺陷变异株的方法 这种方法中有用高丝氨酸缺陷株的赖氨酸发酵，有用精氨酸缺陷株的鸟氨酸发酵，还有用异亮氨酸缺陷株的脯氨酸发酵等。 谷氨酸棒状杆菌的代谢调节与赖氨酸生产 天冬氨酰磷酸 天冬氨酸-β-半醛 高丝氨酸 高丝氨酸磷酸 O-琥珀酸高丝氨酸 二氢吡啶-2,6-二羧酸 赖氨酸 苏氨酸 异亮氨酸 蛋氨酸 天冬氨酸 1 2 3 4 5 黄色短杆菌的代谢过程 人工控制黄色短杆菌的代谢过程生产赖氨酸 高丝氨酸 脱氢酶 可以大量积累 天冬氨酸 中间产物Ⅰ 天冬氨酸激酶 中间产物Ⅱ 甲硫氨酸 苏氨酸 高丝氨酸 赖 氨 酸 人工诱变的 菌种不能产生 应用营养缺陷性突变株生成氨基酸 氨基酸 微生物 营养缺陷型 氨基酸 微生物 营养缺陷型 赖氨酸 谷氨酸棒杆菌 高丝氨酸 缬氨酸 谷氨酸棒杆菌 亮氨酸 苏氨酸 大肠杆菌 蛋氨酸、 缬氨酸 鸟氨酸 谷氨酸棒杆菌 瓜氨酸或精氨酸 苯丙氨酸 谷氨酸棒杆菌 酪氨酸 瓜氨酸 谷氨酸棒杆菌 精氨酸 酪氨酸 谷氨酸棒杆菌 丙氨酸、 嘌呤 高丝氨酸 谷氨酸棒杆菌 苏氨酸 亮氨酸 谷氨酸棒杆菌 苯丙氨酸 脯氨酸 谷氨酸棒杆菌 异亮氨酸 3、类似物抗性变异株的方法 用一种与自己想获得的氨基酸结构相类似的化合物加入培养基内，使其发生控制作用，从而抑制微生物的生长。这样，就可以得到在这种培养基中能够生长的变异株，而这种变异株正是解除了调控机制的，能够生成过量的氨基酸。 利用此方法发酵的有:苏氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、组氨酸和精氨酸。 抗结构类似物突变 一种氨基酸终产物，在正常的情况下，参与蛋白质合成，过量时可抑制或阻遏它自身的合成酶类。如果这种氨基酸的结构类似物也显示这种抑制或阻遏，但却不能用于蛋白质的合成，那么当用这种