试验一无菌技术及培养基的配制.ppt

—— 宜 宾 学 院 工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验 工业微生物与育种学 实验 Part Ⅰ 实验基本操作技能 实验一 无菌技术及培养基的制备 —— 宜 宾 学 院 工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验 主要参考资料 ? 微生物学实验指导：黄秀梨 ，高等教育出版社 ， 2002 ? 微生物学实验教程：杨革 ，科学出版社 ? 微生物学教程（第 2 版）：周德庆 ，高等教育出版社， 2000 ? 《工业微生物实验操作手册》，诸葛健，轻工出版社， 1997 。 ? 《伯杰士细菌系统发育手册》、《真菌鉴定手册》、 《酵母鉴定手册》、《放线菌鉴定手册》等工具书 —— 宜 宾 学 院 工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验 成绩评定 ? 单独设课，作为一门独立课程严格进行成绩考核。本门 课程成绩评定由平时成绩（ 80% ） + 实验理论考试 （ 20% ）组成。 ? 平时成绩包括下列项目： – ①实验纪律及准备（ 20 ％） – ②平时实验操作和技能（ 25 ％） – ③实验报告（ 20 ％） – ④实验设计创新能力及其它能力（ 15 ％） —— 宜 宾 学 院 工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验 ? 实验考试为理论与实践结合的考试，随机从题库中抽取 题目，分为： – (1) 微生物学实验的基本操作技能，包括根据菌落形态鉴别所属 菌类，制片镜检，选择相应的配方，配制斜面、平板培养基， 包扎灭菌，在培养基上进行分离接种操作等； – (2) 设计一个大型综合实验的具体实验方案。 ? 相对应的考核方法为： – (1) 由学生从题库中随机抽取 5 道题，现场口头回答，每题 2 分 力，教师根据其回答情况评分，一共 10 分； – (2) 开卷，在大型综合实验，即实验四进行之前完成，占 10 分。 —— 宜 宾 学 院 工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验 实验安排 模块 实验项目 学时 备注 I 培养基的制备 6 必做 微生物的分离纯化 8 必做 微生物显微技术 6 必做 II 曲药中高温芽孢菌的分离及初步鉴定 12 选做 酿酒微生物生产特性的检测 12 选做 窖（曲）房空气微生物的检测 12 选做 酿酒酵母的诱变及高乙醇耐受性菌株的筛选 12 选做 四大类型菌 DNA 的提取及 PCR 扩增 12 选做 —— 宜 宾 学 院 工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验 实验报告内容 ? 目的要求 ? 实验原理 ? 实验材料 ? 实验步骤 ? 结果与讨论 —— 宜 宾 学 院 工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验 1.1 无菌技术与培养基的制备 （ 1 ）微生物培养的常用器具及其灭菌 （ 2 ）培养基配置的一般过程 （ 3 ）选择培养基 —— 宜 宾 学 院 工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验 1 、 Petri dish （ 1 ）微生物培养的常用器具及其灭菌 —— 宜 宾 学 院 工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验 —— 宜 宾 学 院 工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验 —— 宜 宾 学 院 工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验 —— 宜 宾 学 院 工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验 （ 2 ）培养基制备的一般程序 ? 调配 ? 过滤 ? 矫正 pH ? ? 分装过滤 ? ? 灭菌（一般 121.3 ℃ ， 20-30min ） ? ? 鉴定是否有菌 ? ? 放入冰箱冷藏备用 ? 鉴定是否有菌可将培养基置于 37 ℃ 培养 24 小时，然 后观察 —— 宜 宾 学 院 工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验 培养基： 液体培养基； 固体培养基； 半固体培养基； —— 宜 宾 学 院 工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验 固体培养基； 半固体培养基； 琼脂 —— 宜 宾 学 院 工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验 实验室常用培养基 ? 肉膏蛋白胨培养基： 牛肉膏 3g ，蛋白胨 10g ， NaCl5g ，琼脂 15-20g ，水 1000ml ， pH7.0-7.2 ； ? 淀粉琼脂培养基（高氏 1 号培养基）： 可溶性淀粉 20g ， KNO 3 1g ， NaCl0.5g ， K 2 HPO 4 0.5g ， FeSO 4 0.01g ，琼脂 20g ，水 1000ml ， pH7.0-7.2; ? PDA 培养基： 马铃薯（去皮） 200g ，蔗糖或葡萄糖 15g ，琼脂 15-20g ， 水 1000ml; —— 宜 宾 学 院 工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验 ? 因高压之后 pH 值会下降 0.1 左右，所以矫正 pH 时应比所需的 pH 高 —— 宜 宾 学 院 工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验