辽宁慢生根瘤菌抗铜基因的克隆及功能分析.docxVIP

辽宁慢生根瘤菌抗铜基因的克隆及功能分析 土壤的铜污染会给其中微生物造成一定的选择压力 , 根瘤菌要保证自身的存 活并且与宿主植物形成有效的共生固氮体系 , 必须采取一定的保护机制来抵抗高 铜浓度造成的胁迫。分离自陕西宁强代家坝铜锌矿中的辽宁慢生根瘤菌 Bradyrhizobium liaoningense CCNWSX0360 对铜的最大耐受浓度为 2.0 mM。 本文利用转座子 Tn5-pRL1063a 对 B.liaoningense CCNWSX0360 进行随机突 变 , 建立了库容为 17247 的突变体库。铜敏感性筛选获得 6 株突变株 Bln-d 、 Bln-163 、Bln-c 、Bln-29 、Bln-32 和 Bln-54 。 采用质粒挽救法确定 Tn5 的插入位点 , 结果显示 Bln-d 和 Bln-163 中 Tn5 插 入到同一个基因的不同位置 , 相似性比对鉴定为编码重金属转运 P1B-type ATPase的基因 , 命名为 cueA, 其余 4 个突变体中 Tn5 分别插入到基因 copA( 编码 多铜氧化酶 ) 、ctpA( 编码羧基末端处理酶 ) 、tolC( 编码 TolC 家族蛋白 ) 和 lptE( 编 码脂多糖转运分子伴侣 ) 内部。重金属耐受性分析结果显示 :Bln-d 、Bln-163 、 Bln-c 专一对铜敏感