组织培养技术的基本的理论知识新修.ppt

; 讲 授 内 容 细胞培养的基本理论知识 细胞培养设施和基本条件 细胞培养培养用液 培养用品的清洗和消毒 细胞的原代与传代培养 细胞的冻存、复苏与运输 细胞培养中的基本方法 细胞培养的污染和排除 细胞培养常见问题解答 ;　　　　　第一章　;　组织培养工作开始于20世纪初，Harrison(1907)最早对两栖类胚胎的神经管组织进行了悬滴培养-哈里森悬滴培养法 　真正开创大规模细胞培养工作是在20世纪40年代，W.Earle和R.Dulbecco设计出了细胞培养液配方，并开始了单细胞的悬液培养，细胞培养工作才得到广泛发展。 细胞培养始传我国是20世纪30年代。至50年代以后，组织培养已在我国逐步开展起来 ;　　第一节 细胞培养基本概念 ; 体外培养　细胞培养 （In Vitro） 　　　　　　　组织培养 　 　　　　　　器官培养 ; 一、 什么是细胞培养？  (cell culture)  ; 多种学科均可利用细胞培养进行研究，如：细胞学、免疫学、肿瘤学、生化学、遗传学、分子生物学等。 可供实验的组织细胞来源众多，包括各种动物的各类组织细胞，可以是动物的胚胎或成体；可以是正常组织或肿瘤组织细胞等。;细胞培养可以大量提供在同一时期、条件相同、性状相似的实验样本，因此有时可比体内实验经济的多。例如，一个需要100只鼠才能得出结论的实验可能用100片盖玻片或几个多孔培养板而获得具有相同统计学意义的结果。 ;克隆羊多莉;单克隆抗体制备过程; 优点： 1.活细胞： 能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构、生命活动等 　;2.可控制： 选择对象：均一性、重复性 哪一种：类型：上皮？间质？ 性质：正常？肿瘤？ 阶段： 调节条件：物理、化学、生物等因素可控 研究方法：可采用各种研究技术、记录方法 ; 3.应用广：学科多， 对象广。 4.较经济： 可提供大量、同时、重复性好的、生物学性状相似的实验对象 ;细胞培养技术的主要优点(小结）;缺点：;１.与体内主要不同: 　相对孤立、相对单一，缺乏体内的系统作 　用、失去神经体液的调节和细胞相互间的 　影响。 2.主要表现: 失去原有组织结构和细胞形态，分化减弱或不显，细胞趋向单一化； 3.提示:要正确认识体外培养细胞：是一种特定条件下生长的细胞群体。 ;体内、外细胞的差异:;　第二节 组织培养的细胞生物学 ;粘附型细胞：;细胞在体内、外的粘附方式存在差异： 体内：粘附是全方位，外形具有复杂的立体特征 体外：多数情况，细胞只有一个附着平面，外形一般与体内时明显不同 ;按照培养细胞的主要形态，可分为以下类型：;;　上皮样细胞型 ;生长特点: 易相连成片:相靠—紧密相连—成薄层—铺路石状; 生长时呈膜状移动， 很少脱离细胞群而单个活动 ;倒置相差显微镜下HUVEC形态(×100);倒置相差显微镜下人脐静脉 内皮细胞形态(×100);成纤维细胞样细胞 ;　生长特点: 排列成放射状，漩涡状并不紧靠连成片;细胞—细胞接触易断开而单独行动 游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起 ;体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞; ;游走型细胞: 具有类似巨噬细胞样的特征。经常处于较活跃的变形及游走状态，因此外形不规则且不断变化。当细胞密度增大相互连接成片时，游走受限，形状上类似上皮型细胞或成纤维细胞型的细胞。 表现这种形态的细胞主要是具有吞噬作用的单核巨噬细胞系统的细胞，如颗粒性白细胞、淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、肝枯否细胞(Kupffer cell)以及某些肿瘤细胞等。 ;多形型细胞: 多形型细胞是一些形态上不规则的细胞，但 它不像成纤维细胞型的细胞那样，不规则形 态由宽扁的胞质突起所致。其细胞一般分胞 体和胞突两部分。胞突为细长形，似丝状伪 足。胞体虽略呈多角形，但没有成纤维细胞 型那样不规则。体外培养中呈现多形型的细 胞最常见的类型是神经元和神经胶质细胞 。;注意： 细胞形态并非固定不变，可随培养条件、生长时期、细胞数量等而变化。 细胞形态只是对培养物判断或识别的参考指标。 若要确定某一培养物的确切细胞类型，必须借助更为特异的鉴定方法，如进行组织化学或免疫细胞化学染色鉴定。;培养细胞形态不稳定:条件改变，细胞形态可有变化 　　血清 高血清 低血清