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;5.3 重组体克隆的筛选和鉴定;一、抗药性标记及其插入失活选择法;pBR322;（1）四环素：;3. 选择过程：;;（2）氨苄青霉素抗性插入失活选择过程;二、?-半乳糖苷酶显色反应选择法;假阳性：
如果插入的外源DNA正好是3的倍数并且没有中止密码；（不破坏?肽）。;;利用插入的外源基因的表达产物特性进行直接选择。（只在特定条件下）。;小鼠的二氢叶酸还原酶（DHFR）对三甲氧苄二氨嘧啶有抗性。;利用有插入片段的重组载体的分子量比野生型载体分子量大。;二、酶切电泳筛选法;;三、PCR扩增检测法;1. 核酸杂交;二、核酸杂交检测方法;（1）原位杂交筛选;（2）R-环检测法;;2. Northern blotting;原位杂交法筛选DNA重组体图解;Southern印迹法;Southern和Western印迹法;利用抗体作为“探针”来检测转入受体菌并且表达出相应的蛋白质的外源基因。;;2. 放射性抗体检测法过程;3. Broome-Gilbert双位点检测法;;二、免疫沉淀检测法;;三、酶联免疫吸附测定（ELISA）;;2. ELISA检测的一般步骤;加入一抗，反应后冲洗掉未结合的抗体。;加入二抗，与一抗结合后再将未结合的二抗冲洗掉。二抗只识别一抗。;加入无色的底物，被二抗上所带的酶催化反应转变成有色物质（或发光）。;;在特殊的分光光度仪（酶标仪）上比色，打印出结果。;3.ELISA的局限性;无细胞翻译系统;一般克隆与筛选策略;5.3.7 几种常用的真核生物重组基因选择方法;二、植物转化体报道基因筛选法;2. 几种报道基因的作用原理;Fireflies emit light catalyzed by luciferase with ATP;转入萤火虫的luciferase的烟草
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