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细菌鞭毛染色及活细菌运动性观察 作者：刘璐 11级生物基地 2011100140146 同组者：李志乾刘本法降雨沛谢博洋 摘要：采用硝酸银染色法对苏云金芽泡杆菌与铜绿假单胞菌进行鞭毛染色，在显 微镜下观察鞭毛的长短，数量，着生位置，并采用床滴法对细菌的运动性进行观 察。 关键词：硝酸银染色法苏云金芽泡杆菌铜绿假单胞菌鞭毛压滴法 1?前言 1.1实验目的 学习并掌握鞭毛染色法，观察鞭毛的形态特征。 学习用压滴法观察活细菌的运动性。 1.2实验原理 鞭毛是细菌的纤细丝状运动“器官”。鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要 指标。鞭毛育径一般为10?30nm,只有用电镜才能直接观察到。若要用普通光学显微镜观察, 必须使用鞭毛染色法。 鞭毛染色的基木原理是在染色前先用媒染剂处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然 后用碱性复红（Gray氏染色法）、碱性复品红（Leifson氏染色法）、硝酸银（West氏染色法） 或结晶紫（Difo氏染色法）进行染色。木实验采用的是硝酸银染色法。 在显微镜下观察细菌的运动性，也可以初步判断细菌是否冇鞭毛。细菌运动性的观察可 用压滴法和悬滴法。观察时，要适当减弱光强度以增加反差，若光线太强.细菌和周围的液 体难以区分。 2.材料与方法 2?1材料 2.1.1菌种 苏云金芽砲杆菌，铜绿假单胞菌 2.1. 2溶液和试剂 香柏油，二甲苯，硝酸银鞭毛染液，0.01%美蓝水溶液等。 2.1.3仪器和其他用品 普通光学显微镜，酒精灯，载玻片，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦 镜纸，接种环，试管，银子，滴管，盖玻片，吸水纸等。 2.2方法 2.1压滴法 2.1.1菌液制备 无菌操作用接种环由铜绿假单胞菌平板上挑取菌落边缘菌体，悬浮于1? 2ml蒸倔水屮制成轻度混浊的菌浮液，不能剧烈震荡。 2.2.1.2 制片 加1滴菌液于盖玻片的屮央，盖上盖玻片，用吸水纸将多余水吸去，再滴加 少许美蓝水溶液，然后用吸水纸将多余水吸去。 2.1. 3 镜检 先低倍观察，再高倍观察，最后再用油镜观察，观察时要多找一些视野。 2. 2硝酸银染色法 2. 2. 1载玻片准备 将新的载玻片至于清水中充分洗净，在置于95%乙醇屮浸泡，使用吋取出在 火焰上稍微加热烧去乙醇及残留油迹。 2. 2. 2菌液制备 无菌操作用接种环分别由苏云金芽他杆菌培养基和铜绿假单胞菌平板上挑 取菌落边缘菌体，悬浮于1?2ml蒸倔水屮制成轻度混浊的菌浮液，不能剧烈震 荡。 2. 2. 2. 3 制片 取一滴菌悬液滴到洁净载玻片一端，倾斜玻片，使菌悬液缓慢流向另一端, 用吸水纸吸去多余菌悬液，自然干燥。 2, 2, 4 染色 滴加硝酸银染液A液覆盖菌面3?5 min后用蒸憾水充分洗去A液。用硝酸 银染液B液洗去残留水分后，再滴加B液覆盖菌面数秒至lmin,其间可用微火 加热，为菌面出现明显褐色吋，立即用蒸倔水冲洗，自然干燥。 2.2.1.5 镜检 先低倍观察，再高倍观察，最后再用油镜观察，观察吋要多找一些视野。 结果及分析 3.1实验结果 3.1.1压滴法实验结果 用压滴法观察枯草杆菌的运动性，盖上盖玻片立即观察吋，盖玻片下里液体流动 较明显，菌体随水流运动，运动方向较统一且呈直线状。待液体稍蒸发，盖玻片 下液体充分但不流动吋观察，细菌的运动朝不同的方向，运动过程屮可转弯；有 些细菌在原地左右摆动，应为布朗运动。丿禾滴法检查细菌的运动性来判断鞭毛的 有无快速、简洁，但受操作和滴加美兰试剂的量影响较大。 1. 2鞭毛染色实验结果 染色后实验结果 菌种 鞭毛着生位置 数量 枯草芽砲杆菌 周生 很多 铜绿假单胞菌 端生 1  图1 压滴法枯草芽胞杆菌（10X100） 图2 硝酸银法枯草芽砲杆菌（10X100） 图3铜绿假单胞菌运动观察（10X100） 2结果分析 2.1压滴法 菌体为铜绿色，随水流运动，运动方向较统一且呈直线状；当液体充分但不 流动时，细菌的运动也有一定方向。当水分丧失后，菌体不再运动。 2. 2硝酸银染色观察鞭毛 镜检结果：菌体呈深褐色，鞭毛呈浅褐色。由经硝酸银染色后所观察到的苏 云金芽泡杆菌与铜绿假单胞菌的鞭毛形态特征可知：苏云金芽泡杆菌的鞭毛为周 生鞭毛，铜绿假单胞菌则为单级生鞭毛。 3思考题 3.3.1鞭毛染色的注意事项：①取菌后的接种环在蒸傳水屮轻轻沾几下即可，不 要用力太猛，更不能用接种环大幅度涂开；将载片稍倾斜，使菌液散开即可，否 则鞭毛易脱落，造成染色失败。②鞭毛染色的载玻片只能自然干燥，不能加热， 这是由于加热后菌体易变形，鞭毛易脱落，影响观察。 3.2鞭毛与菌体脱离的原因：①选用的菌种可能为老龄菌种，鞭毛易脱落。② 在制备菌种悬浮液吋振荡幅度太大，使鞭毛脱落。③鞭毛染色吋，应该自然干燥 的步骤直接煽风吹干，是鞭毛脱落。 小结 木次实验主