不同园艺植物花粉离体培养生活力的测定分析.ppt

2021/2/6 * 三、实验材料、主要仪器和试剂 1.材料:不同园艺植物,任选3种 2.主要仪器:镊子、显微镜、恒温箱、培养皿、烧杯、玻璃棒、量缸、电磁炉、标签、记号笔、离心管、冰箱、牙签、分析天平。 3.主要试剂:琼脂、蔗糖、硼酸、无水CaCl2 。 2021/2/6 * （一）形态检测法 ⑴ 把具有品种典型性的花粉粒作为具有生活力的花粉; ⑵ 把小的、皱缩的、畸形的以及没有内含物的作为没有生活力或具有较弱生活力的花粉。 花粉置于载玻片上,滴上水,盖上盖玻片观察,然后自制表格进行记载。 四、实验方法分别介绍 2021/2/6 * ? （1）采集花朵 选择正常的无病虫害的园艺植株上含苞待放正常的花朵,采集后带回实验室剔除过大及过小的以及一些叶子和杂质。 （二）花粉萌发检测法 2021/2/6 * （2）收集花药及散粉 用镊子取出花药（每个园艺植物取20个花蕾的花药）置于培养皿（纸盒-花粉量多）中,写上标签,进行必要的加温处理（培养箱温度25℃使其散粉。 2021/2/6 * （3）花粉的储藏 散粉然后将花粉收集于2ml的离心管（花粉瓶）中,用封口膜密封盖子,写上标签置于冰箱（-20℃）内储藏备用。（或者不同温度25℃,5℃、0℃、-20℃、-40℃和-86℃下贮藏）。注意采集花药开裂前后的新鲜花粉,对不成熟的幼嫩花药的花粉,成熟过头的花粉被雨露粘湿的花粉,有疑问的花粉杂质要除去。 2021/2/6 * （4）培养基的配制  2021/2/6 * 培养基的配制: 琼脂量:7g/L, 蔗糖:15g/100mL（15%）,调pH6.0,分装到培养皿中,凝固后即为花粉离体培养的发芽床。 2021/2/6 * 花粉培养为固体培养,琼脂需要的量是5g/L-7g/L,在琼脂中分别添加蔗糖、硼酸、氯化钙为参照因素,按照（三因素三水平）进行正交设计。 按照设计进行配置培养基。 2021/2/6 * 因素 水平 1 100 50 100 2 150 100 150 3 200 150 200 表1 因素水平表 2021/2/6 * 试验处理 列号 1（A） 2（B） 3(C) 1 1 1 1 2 1 2 2 3 1 3 3 4 2 1 2 5 2 2 3 6 2 3 1 7 3 1 3 8 3 2 1 9 3 3 2 表2 花粉培养正交试验正交表 2021/2/6 * （5）撒播花粉 取出花粉,用牙签沾取已经散好的花粉轻轻均匀抖在培养基上,抖上之后先在显微镜下观察,要求每个视野内30～50个,避免成团影响观察效果。 按要求撒好后用记号笔在标签上做标记（时间、品种、组别）放在25℃培养箱内进行培养,观察花粉管的萌发伸长。 2021/2/6 * （6）观察 培养1h,2h,3h,5h后 进行显微镜观察,观察萌发的个数,每个培养皿观察3个重复,算出平均数,然后计算不同园艺植物不同贮藏条件下离体培养的花粉萌发率。 萌发率（%）=（已萌发的花粉粒数目/花粉粒总数）*100% 2021/2/6 * （7）结果统计表1 材料1的花粉萌发率 2021/2/6 * （8）照片描述 桃的花粉萌发率的观察 2021/2/6 * 桃的花粉萌发情况的观察 2021/2/6 * 桃的花粉萌发情况的观察 2021/2/6 * 杏梅的花粉萌发情况的观察 2021/2/6 * 1.碘-?碘化钾染色测定法? 【原理】多数植物正常的成熟花粉粒呈球形,积累较多的淀粉,I2-KI溶液可将其?染成蓝色。发育不良的花粉常呈畸形,往往不含淀粉或积累淀粉较少,I2-KI溶液染色呈黄褐色。因此,可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。? （三）染色检测法 2021/2/6 * 【器材与用具】???? 显微镜;载玻片与盖玻片;镊子;棕色试剂瓶;烧杯;量筒;天平。???? 【试剂】? ?I2-KI溶液 2021/2/6 * 【步骤】?采集成熟花药,取一花药于载玻片上,加一滴蒸馏水,用镊子将花药捣碎,使花粉粒释放,再加1～2滴I2-KI溶液,盖上盖玻片,在显微镜下观察。 凡是被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒,呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。观察2～3张片子,每片取5个视野,统计花粉的染色率,以染色率表示花粉的育性。 2021/2/6 * 2.氯化三苯基四氮唑（TTC）法 【原理】?具有活力的花粉呼吸作用较强,其产生的NADH2或NADPH2可将无色的TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）还原成红色的TTF（三苯基甲）而使其本身着色,无活力的花粉呼吸作用较弱,TTC的颜色变化不明显,故可根据花粉吸收TTC后的颜色变化判断花粉的生活力。? 2021/