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耐多菌清真菌杀虫剂的研制 化学农药防治害虫尽管有很多优点 , 但是大量使用化学农药后引发一系列的 安全问题 , 因此可克服这些问题的防治方法—生物防治得到了更多研究者的关注。 生物防治的方法有很多种 , 但是并不是每一种都适用于害虫防治中 , 昆虫病原真 菌杀虫剂有很多优点 , 比如 , 主动感染寄主并且具有致死作用 ; 循环侵染是其他微 生物杀虫剂所没有的一个特点 ; 一般情况寄主不会产生抗性 ; 因此国内外都集中 研究昆虫病原真菌杀虫剂。 莱氏野村菌 (Nomuraea rileyi, 简称 Nr, 又称为莱氏蛾霉 ), 在世界各地均有 分布 , 是昆虫的重要病原真菌。 该菌杀虫毒力强 , 寄主范围广 , 能寄生 30 多种鳞翅 目害虫 , 特别是对鳞翅目夜蛾科类的昆虫有着非常强的致病力 , 能在多种农业系 统中引发流行病 , 并且针对性非常强 , 对人体、其他非目标昆虫包括寄生虫还有捕 食者无毒害作用。 多抗霉素是一种广谱性抗生素类杀菌剂 , 这种杀菌剂因其内吸传导特性和水 溶特性 , 对作物的抗病效果良好 , 对环境影响却很小 , 因此被广泛使用。目前 , 国内 外有关莱氏野村菌对抗生素类杀菌剂的敏感性还没有系统详细的报道 , 且很少有 报道使用耐药性莱氏野村菌进行生物防治害虫。 因此研究莱氏野村菌对抗生素的敏感性 , 并运用各种胁迫方法产生耐药性莱 氏野村菌菌株 , 对于生物防治具有重要意义。 本研究通过对 10 株莱氏野村菌菌株 的室内毒力测定 , 筛选出对斜纹夜蛾具有高毒力的菌株 , 并对高毒力菌株进行紫 外诱变和含多抗霉素平板的胁迫 , 筛选出耐多抗霉素的莱氏野村菌菌株。 为莱氏野村菌和多抗霉素复配制剂研究提供依据。主要研究结果如下 :1. 本 研究通过使用 10 株供试莱氏野村菌菌株对斜纹夜蛾 3 龄幼虫致病毒力进行测定 , 莱氏野村菌侵染后的僵虫先为白色 , 然后变为深绿色。 感染致死初期 , 幼虫身体发僵、 挺直或扭曲 , 发病后期幼虫出现吐水、 下痢等 症状。结果表明不同菌株的致病力存在差异 , 综合比较僵虫率、校正死亡率以及 致死中时间 (LT50), 其中以 Nr19 菌株的致病力最强 , 校正死亡率及僵虫率分别为 100%和 86.6%,致死中时间 LT50 为 5.0501d;Nr16 和 Nr41 紧跟其后 , 校正死亡率 分别为 100%和 93.2%, 僵虫率分别为 80.0%和 85.7%, 致死中时间 LT50 分别为 3.9436d 和 4.2130d 。 Nr16、Nr19、Nr41 用于后续试验。 2. 以筛选到的 Nr16、Nr19、Nr41 菌株为研究对象 , 根据对菌株适合致死率 75%-85%,确定紫外诱变条件为 : 在孢子浓度 1x107 个/mL 时, 采用 30W紫外灯 , 照射距离为 30cm时,Nr16 、Nr19、Nr41 照射时间分别为 2.5min 、4.0min 、 3.5min 。 采用菌丝生长抑制率法测定了紫外诱变后的莱氏野村菌对多抗霉素的敏感性。发现不同诱变菌株莱氏野村菌对多抗霉素的敏感性存在一定的差异。 诱变菌株 Nr4101 的 EC50值最大 , 诱变株 Nr1601 的 EC50值最小 , 分别为 1.0540mg/mL和 0.4377mg/mL。3. 根据多抗霉素在田间的施用浓度是 1.67-2.50mg/mL 。 结合紫外诱变菌株的最小抑菌浓度。在含多抗霉素平板上 , 通过涂分生孢子 法定向筛选莱氏野村菌耐多抗霉素菌株。 获得了一株耐药性莱氏野村菌菌株 Nr16-I 。验证结果表明该菌株 Nr16-I 在 含多抗霉素和不含多抗霉素的平板上均生长。 本实验筛选到的莱氏野村菌 Nr16-I 菌落色泽为乳白色 , 菌落形态为绒毛状 , 孢子粉为浅绿色 , 在 SMAY培养基上一般约 3-5 天就开始产孢。