液相层析分离法.pptVIP

2021/3/17 * 15cm 2.5cm 1.5cm 溶剂前沿 2021/3/17 * （３）展层 　　薄层的展开需在密闭的器皿中进行,密闭容器应用展开溶剂予先饱和。展开方式和纸层析相同。但不加粘合剂的薄板只能作近水平式（与平面成20 ~ 10oC角）的上行或下行的展层而不能垂直展层。 2021/3/17 * 把点好样品的薄板浸入0.5cm深的适宜展开剂中,当展开剂移动至离起点约10 ~ 20cm处(约30min),将薄板取出放平,用铅笔或小针记下溶剂前沿的位置后,在室温干燥或烘箱内干燥,测其Rf值。 2021/3/17 * 注意:每次的展层距离要固定,以便Rf值的重复 2021/3/17 * 　二次展开 　　对于组成比较复杂的试样,一次展开不能使 各组分完全分离,可用另一种（或同一种）展开 剂进行第二次展开． 　连续展开 　　某些组分比移值较小且分离较难,可采用连 续展开． 　双相展开 　　对组分较多性质接近的难分离试样,用双向 展开可获得较好的效果． 2021/3/17 * （４）检出 a.本身是有色物,可以直接观测斑点的位置和颜色 b.本身无色但在紫外线的照射下会发出不同颜色的荧光 c.薄板本身有荧光（硅胶HF254+366, 硅胶GF254, ......), 欲测物吸收紫外线, 在荧光背景下呈暗色 2021/3/17 * d.多数有机物, 喷10 ~ 50% H2SO4(或铬硫酸)并在100 ~ 120oC加热, 使有机物碳化, 观察加热中有机物颜色变化及碳化斑点位置, 可以推断物质的化学性质 e. 喷显色剂或荧光试剂（不含粘合剂的薄板不能喷,只能浸,以免把吸附剂吹散） 2021/3/17 * 表 主要显色试剂 试剂 配制及使用方法 检出范围 浓H2SO4 喷雾, 100 ~120oC ?, 观察颜色变化 高级醇、醛、酮、甾体 H2SO4-K2Cr2O7 5g K2Cr2O7+100mL H2SO4, 喷雾,　280oC观察颜色变化 全部有机物 2’,7’-二氯荧光黄(0.2%乙醇) 喷雾,紫外线照射 全部有机物 I2-KI 1g I2 +10gKI溶于50mLH2O中,加入2mLHAc,稀释至100mL,喷雾 生物碱 2021/3/17 * 试剂 配制及使用方法 检出范围 溴甲酚绿 0.04g溶于100mL乙醇中,以0.1 mol / L NaOH调至蓝色刚消失, pH＜3.6显黄色 羧基酸 Ag(NH3)2+ 2.6gAgNO3溶于50mL水,加入NH3H2O至沉淀刚好消失 还原性物质、醛、还原糖 茚三酮 0.5%丙酮溶液 胺类（如麻黄碱、氨基酸等） FeCl3 1g溶于100mL 酚羟基、鞣质、黄酮 磷钼酸 5g溶于100mL95%乙醇 脂肪、甾类、类脂、三萜酸、生物碱 2021/3/17 * 5. 应用 (1)氨基酸分离 薄层:硅胶G板; 流动相: 正丁醇:醋酸:水=3:1:1 Rf值:丙氨酸0.27, 氨基辛酸0.60, 精氨酸盐酸盐0.08, 磺基丙氨酸0.14, 胱氨酸盐酸盐0.16, 二羟基苯丙氨酸0.45, 甘氨酸0.22, 组氨酸盐酸盐0.06, 羟脯氨酸0.20, 亮氨酸0.47, 甲硫氨酸0.40, 颉氨酸0.36, 苯丙氨酸0.49, 脯氨酸0.19, 肌氨酸0.17, 苏氨酸0.25, 色氨酸0.56 2021/3/17 * 流动相 分离情况 丁醇:HAc:乙酸乙脂:水＝10 : 2 : 1 : 7 从Fe、Al、Ti中分离出Ga 乙酸乙脂:水:HNO3＝85 : 10 : 5 从稀土、Zr、Ti、Th中分离出Sc 乙醚:浓HNO3 ＝87.5 : 12.5 Hf－Zr 4 mol/L HCl 饱和丁醇 UO2－Th 2021/3/17 * 例9．生物学应用 Fe Cu Co Ni Ni Ni Ni Ti Mo 黑毛 红毛 黄毛 白 毛 兔毛的色谱图 毛发是这样,皮肤是否是这样 ? ? 取不同颜色兔毛(300 ~ 500 mg), 干法灰化, 溶于稀HCl 中,用 丙酮 : 丁醇 : HCl = 10 : 4 : 2, 展开后,显色 2021/3/17 * 用纸色谱法分离A、B两种物质,在某条件下两物 质的比移值Rf分别为0.36、0.40。设A、B两物质 斑点的直径分别为0.2 cm,0.4 cm,当展开剂的前 沿达到10 cm时,A、B能否完全分离? 设A、B两物质色谱斑点的中心距原点分别为x1,x 2 cm,则 x1/10 = 0.36 x2/10 = 0.40 x2-x1 = (0.40-0.36)?10 = 0.