Wolbachia在北京地区小菜蛾种群中的感染.docx

Wolbachia 在北京地区小菜蛾种群中的感染 摘要 Wolbachia 是一类广泛分布于节肢动物体内， 可以引起其寄主生殖行为改变的细胞内共生细菌。小菜蛾 Plutdla xylostella(L.)是常见的鳞翅目害虫，严重危害十字花 科植物。通过对 Wolbahcia 的 wsp 基因的 PCR扩增及克隆测 序，明确 Wolbachia 在北京地区小菜蛾野生种群内及其个体 体内的分布情况。研究发现，在北京地区小菜蛾的野生种群 中，感染了一种 Wolbahcia ，将其命名为 wXyZ，并在 GenBank 中进行注册；在小菜蛾成虫的个体体内，其胸部，腹部及足 内都有 Wolbachia 分布，而且所感染的 Wolbachia 完全相同。 wXrl 属于 Wolbachia B 组中的 Pip 亚组。研究首次发现在我国 小菜蛾的野生种群内有 Wolbachia 感染的现象。 关键词 Wolbachia ，小菜蛾，感染，菜蛾科 Wolbachia 属于细菌门、变型菌纲的 a 亚纲、立克次氏 体目、立克次氏体科、 Wolbachia 属，是一类寄生在节肢动 物体内的细胞质遗传的共生菌。 Wolbachia 通过诱导产雌孤 雌生殖、引起细胞质不亲和、遗传雄性的雌性化、雄性致死 和增强生殖力等作用方式引起其寄主生殖行为的改变。 Wolbachia 在节肢动物中具有广泛的分布，据报道在包括昆 虫在内的许多种节肢动物和线虫中， 有 20％以上的种类都感 染了 Wolbachia 。Tagaml 等对日本鳞翅目昆虫中的 49 个种和 9 个科进行了调查，结果表明 44.9％的种和 77.8％的科都感 染了 Wolbachia 。 小菜蛾 Plutella xylostela(L.) 属鳞翅目菜蛾科， 是世界性十 字花科蔬菜害虫。近 20 多年来，小菜蛾已成为我国十字花 科蔬菜的主要害虫，发生严重时，损失率高达 20％ *30 ％。 目前对小菜蛾的研究多集中在抗药性、性引诱剂、信息素、 昆虫生理学、病理学、毒理学等方面，关于其体内共生菌 Wolbachia 方面的研究还不是很深入， Jeyaprakash等报道美 国实验室饲养的小菜蛾体内感染了 A、 B 2 种 Wolbachia。而 我国关于小菜蛾 Wolbachia 方面的研究尚未见报道。为了明 确我国小菜蛾体内 Wolbachia 的感染情况，本研究通过 PCR 扩增及分子克隆测序对 Wolbachia 在我国小菜蛾的野生种群 及其个体体内的分布做了调查，这对进一步揭示 Wolbachia 对小菜蛾的生殖调控作用具有重要的意义。此外，研究小菜 蛾与其体内共生菌 Wolbachia 的关系将为我国小菜蛾的防治工作提供新的思路和方法。 材料与方法 1.1 材料 本研究中所用的小菜蛾成虫采自北京市海淀区东北旺 玉米田，用无水乙醇浸泡于－ 20℃保存备用。 1.2 总 DNA 的提取 取 96 头小菜蛾成虫，用灭菌水清洗后将每头成虫分为 头，胸，腹，足四部分，分别置于 1.5mL 的离心管内，加入 200μ L 的提取缓冲液 [100mmol/L Tris-HCI pH 7.0 ； 1.4 mol/L NaCl；20mmol/L EDTA；2％ hexadecyhrimethylammoniumbromide(CTAB)] ，匀浆后 65℃水 浴 1 h，加入 0.1μLRnase 37 1 h。加入 500μ L 氯仿 / 异戊醇 (24:1)，混匀后 10 000 r/min 离心 15 min，将上清液移至一新 的离心管中， 加入 2 倍体积的冰冷无水乙醇和 1/10 体积的 3 mol/L 的醋酸钠 (pH 7.0)，混匀后于－ 20℃沉淀 3 h 以上， 13 000 r/main 离心 15 min ，弃上清，沉淀用 70％乙醇洗 2 次，于室温下干燥，加入 30μ L 灭菌水溶解 DNA，置于－ 20℃保存待用。 1.3 wsp 基因的 PCR扩增及其电泳检测 本实验分别采用 wsp A 和 B 的特异性引物对小菜蛾进行 了 PCR检测，扩增引物分别为： A：136F5’TGA AAT TTT ACC TCT TTT C： 691r5 ’ AAA AAT TAA ACG CTA CTC CA；B： 81f 5 ’ TGG TCC AAT AAG TGA TGA AGA AAC；522Br5 ’ACC AGC TTr TGC YFG ATA. 扩增体系 (25μ L)包括： DNA 溶解液 2.5μ L， 1O × PCR Buiter 2.5 μ L，dNTPs 2 μ L(2.5mmol/L each) ，正反向引物各 1μ L(25 gmol/Leach)