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第一节 PCR扩增法获得目的基;PowerPoint 演示文稿;一、RT-PCR法;常用RNA模板;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;2. 三种不同引物引导的RT-;PowerPoint 演示文稿;3. 已知基因N端部分序列RT;PowerPoint 演示文稿;二、其他PCR法;1. 反向PCR;PowerPoint 演示文稿;1. 锚定PCR;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;第三节 基因组DNA的克隆;基因组文库构建;● 一般流程;● 一般流程;●高分子量环境样品DNA的准备;PFGE分离大片断DNA分子;●载体的选择和制备;PowerPoint 演示文稿;BAC 载体特点;●连接;目标DNA和载体浓度的确定;● 转化;● 阳性克隆的挑选;●BAC 文库的鉴定;BAC 文库的鉴定;PowerPoint 演示文稿;BAC 文库的快速筛选;PowerPoint 演示文稿;基因组文库在环境微生物分子生态;海洋环境BAC文库发现了海洋变;PowerPoint 演示文稿;什么叫做cDNA文库？;构建cDNA文库的基本步骤：;内 容 提 要;一、RNA提取与质量鉴定;1. 细胞总RNA的提取;实验室常用：异硫氰酸胍法（ T;2. mRNA的分离纯化;PowerPoint 演示文稿;3. RNA的质量鉴定;二、cDNA文库构建;1. cDNA第一链的合成;PowerPoint 演示文稿;2. 第二链cDNA的合成;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;3. 双链cDNA的修饰及克隆;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;三、cDNA文库的质量评价;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;DNA诱变;DNA诱变;定点突变;基于PCR的点突变;重叠延伸PCR 法(Over-;大引物PCR (Megapri;特殊位置碱基的定点突变;PCR 介导定点诱变的优点;PCR 介导定点诱变的缺点;不依赖于PCR的定点诱变方法;随机突变;第七节 转化、筛选与鉴定;一、重组DNA导入受体细胞;（二）重组DNA导入原核细胞;PowerPoint 演示文稿;2.电穿孔转化法;3. 接合转化法;4. λ噬菌体转导法;二、 重组子的筛选与鉴定;2. 显色筛选法;3. 营养缺陷型筛选法;4. 噬菌斑筛选法;（二）菌落原位杂交法;三、DNA序列测定;PowerPoint 演示文稿;（二） Maxam-Gilbe;PowerPoint 演示文稿;（三） 大片段DNA的测序方案;（四） 大规模DNA测序的发展;PowerPoint 演示文稿;2. 三种不同引物引导的RT-;PowerPoint 演示文稿;PowerPoint 演示文稿;BAC 文库的鉴定;1. cDNA第一链的合成;三、cDNA文库的质量评价;4. 噬菌斑筛选法