第一章核酸制备.pptVIP

;一、核酸样品的凝胶电泳分析 (一)凝胶电泳检测核酸的基本原理 核酸分子在中性或偏碱性的缓冲系统中带负电，在电泳过程中，核酸分子从负极向正极移动，并按核酸构型和分子大小分离开。电泳后用染料染色。 由于在电泳中往往使用无反应活性的稳定的支持介质，电泳迁移率（或迁移速度）与分子的摩擦系数成反比。而摩擦系数是分子大小、介质粘度等的函数。 因此，可在同一凝胶中、一定电肠强度下、可在凝胶上分离出不同分子量大小或相同分子量但构型有差异的核酸分子。 琼脂糖凝胶电泳，聚丙烯酰胺凝胶电泳;（二）琼脂糖凝胶电泳; 琼脂糖可以形成各种形状、大小的孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA片度大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA片段。琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定的电场下电泳。;(1)凝胶缓冲液和电泳缓冲液 TBE,TAE TAE的缓冲容量最低，如长时间电泳会被消耗，此时凝胶的阳极一侧将发生酸性化； TBE比TAE花费稍贵，但有高得多的缓冲容量。 双链线状DNA片段在TAE中比在TBE中迁移快10%。 对于高分子质量的DNA，TAE的分辨率略高于TBE，对于低分子质量的DNA，TAE要差些。超螺旋DNA在TAE中