分子生物学试题.docxVIP

1、怎样确定双向复制是DNA复制的主要方式，以及某些生物的DNA采取单向复制？ [答] 通过放射自显影方法，在复制开始时，先用低放射性的3H-胸腺嘧啶核苷标记大肠杆菌。经数分钟后，再转移到含有高放射性的3H -胸腺嘧啶核苷的培养基中继续标记。这样在放射自显影图上，复制起始区的放射性标记密度比较低，感光还原的银颗粒密度就较低；继续合成区标记密度较高，银颗粒密度也较高。对于枯草杆菌、某些噬菌体和高等真核细胞的染色体等许多DNA来说，都是双向复制，所以银颗粒的密度分布应该是中间密度低，两端密度高；而对于大肠杆菌噬菌体P2、质体和真核细胞线粒体等某些DNA来说，复制是单向的，则银颗粒的密度分布应该是一端高、一端低。 2、DNA复制需要RNA引物的证据有哪些？ [答] 首先，所有研究过的DNA聚合酶都只有链延伸活性，而没有起始链合成的功能。相反，RNA聚合酶却具有起始链合成和链延伸的活性。另外，一系列实验提供了有关的证据：例如在体外试验中，噬菌体M13单链环状DNA在加入一段RNA引物之后，DNA聚合酶才能把单链环状DNA变成双链环状DNA；同时发现如果加入RNA聚合酶抑制剂利福平，也可以抑制M13 DNA的复制，如果加入RNA引物再加利福平，DNA的合成不被抑制；还发现新合成的DNA片段5′端共价连接着RNA片段，如多瘤病毒在体外系统合成的冈崎片段5′端有长约10个残基的以5′-三磷酸结尾