lightcycler480系统特点及应用方向.pptxVIP

实时定量PCR仪发展简史1985 Kary Mullis 发明了PCR技术1991Hoffmann-La Roche公司获得全球PCR专利权1993罗氏分子系统公司Russell Higuchi发明实时定量PCR仪1993Kary Mullis 因发明PCR技术而获得诺贝尔化学奖1995罗氏诊断公司推出后来成为PCR诊断行业金标准的COBAS Amplicor?分 析仪1999罗氏诊断公司应用科学部推出LightCycler?全自动实时定量PCR系统2005 LightCycler?全自动实时定量PCR系统全球销量突破 5000台，成为全球 销量最大的单型号实时定量PCR系统2005 LightCycler? 480实时定量PCR仪器上市2007目前至今，罗氏诊断公司拥有PCR相关专利上千项，占全球PCR专利的 90%以上。 牛牛文库文档分享Breakthrough to higher ThroughputLightCycler? 系统发展回顾A Decade of Real-Time PCR Speed and Performance 2005 / 2008199820032004 Sample number Detection channels Sample volume [μl] LightCycler? 1.0Instrument32 320 LightCycler?1.5Instrument32 320 LightCycler? 2.0 Instruments 32620 / 100 LightCycler? 480 Instruments (I, II)96 / 384 5 / 6 10 - 100 / 5 - 20 牛牛文库文档分享多孔板模块化软件LightCycler? 480荧光定量PCR系统：系统构成仪器可更换温控模块试剂盒预制探针 牛牛文库文档分享LightCycler? 480荧光定量PCR系统创新的技术改良以获得业内最好的性能独有的Therma-BaseTM技术提升导热效率，提高孔间温度均一性银质散热块加快降温速度加长光路系统改进光学检测的边缘效应快速，高效，均一，无需内参 牛牛文库文档分享热盖 温控系统构成微孔板模块（银制）Peltier 半导体加热单位 冷却装置（银制）Therma-BaseTM温度高度均一性，孔间温度的精确度±0.1℃快速冷却和加热速度 (Heating: (4.8) °C/s - Cooling: (2.5)°C/s)整个板的精确 PCR 结果 96孔模式 1 hour 384孔模式 40 牛牛文库文档分享LightCycler? 480荧光定量PCR仪散热元件：Therma-Base 多孔板座Peltier元件Therma-Base层散热鳍封闭的真空夹层，内壁为灯芯式结构，存贮工作液通过蒸发和凝结过程快速传热 → 使得PCR循环快速而精确! 牛牛文库文档分享热均一性 不同仪器比较LightCycler? 480普通实时定量PCR仪 牛牛文库文档分享LightCycler? 480荧光定量PCR仪温控系统热均一性对实验结果的影响有Therma-Base无Therma-Basemdr1-e26*cyp2C9-e3*cyp2C9-e7*温控的均一性保证了各个反应样品扩增的均一性，极大降低了检测误差率！ 牛牛文库文档分享快速循环模式更快地升降温，提高反应速度，缩短反应进行的时间单位时间内检测的工作量增大，实现更加快速的结果检测！ 牛牛文库文档分享GelAnalysisTime for 30Cycles (hr)Temperature Profiles536 bpSample Temperature (°C)Amplification of a 536 bp ?-globin fragmentfrom genomic DNA Time (hr)快速循环模式更快地升降温，缩短了可能的非特异性结合，提高PCR 的特异性利于PCR体系的优化！ 牛牛文库文档分享典型的96孔板式的顶部光路系统光学系统 – 顶部照射产生的边缘效应CCD相机光源由于光程差,激发光从顶部发出到达每孔的强度不一样，中心强度高于边缘，需要加入内参照来校正光密度不一样 牛牛文库文档分享滤镜轮CCD 相机物镜多孔板LightCycler? 480 光路系统利用优化的光学检测元件（液态光导元件，光通路元件, 滤光片和冷CCD光通路元件）将激发光源通过液态光导元件后变成均一的适合微孔板形状的光线氙灯CCD相机5个激发通道6个检测通道优化光学组件排列设计均一的激发及检测过程 均一的激发和检测，无光程差 无需内参照荧光校正（ROX） 采用折叠光路增加光程，降低激发高度 牛牛文库文档分享内参染料Lig